乙型流感病毒Vero细胞高产适应株及其制备和应用 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101619306A

(43)申请公布日2010.01.06

(21)申请号CN200910094354.6

(22)申请日2009.04.15

(71)申请人中国医学科学院医学生物学研究所

地址650000云南省昆明市五华区茭菱路379号

(72)发明人廖国阳刘泽孙明波李卫东高菁霞马磊周健张新文蔡玮姜述德

(74)专利代理机构昆明正原专利代理有限责任公司

代理人徐玲菊

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

乙型流感病毒Vero细胞高产适应

株及其制备和应用

(57)摘要

本发明提供一种乙型流感病毒Vero

细胞高产适应株及其制备和应用。所述乙

型流感病毒Vero细胞高产适应株命名为：

B/Yunnan/2/2005va(B)，该毒株保藏号为：

CGMCCNo.2931。该毒株能在Vero细胞上

连续传代培养，并且血凝效价可保持在

1∶512以上。经检测，该毒株为乙型流感

病毒，Yamagata谱系。该毒株含有乙型流

感病毒的八个基因片段，且具有Vero细胞

上持续高产的特性。一方面，将该毒株接

种于Vero细胞，收集培养物上清，即得乙

型流感病毒疫苗，实验证实，该疫苗具有

良好的免疫原性和保护效力。另一方面，

该毒株也可作为供体毒株，通过自然选择

压力重配或反向遗传学重配，得到流行株

在Vero细胞上的适应株，从而制备出流行

株Vero细胞流感疫苗。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、一种乙型流感病毒Vero细胞高产适应株，该毒株保藏号为CGMCCNo.2931。

2、一种制备如权利要求1所述的乙型流感病毒Vero细胞高产适应株的方法，其特

征在于经过下列步骤：

1)将临床样本中分离获得的野毒株接种到已长成致密单层的Vero细胞上，以

DMEM/F12或者MEM作为基础培养基，其中再添加TPCK-胰酶至浓度为0.2-

1.5ug/ml、牛血清白蛋白至浓度为0.1-2ug/ml，调节培养液pH值为7-8；于33±1℃

培养48-96h后，收获病毒液，完成第1次传代培养；

2)将上述第1代收获的病毒液再次接种到Vero细胞上，按1)步骤的方法培养后，

收获病毒液；如此连续传代至25代时，收获病毒液，即得保藏号为

CGMCCNo.2931的乙型流感病毒Vero细胞高产适应株。

3、如权利要求1所述乙型流感病毒Vero细胞高产适应株在制备乙型流感流行株的

Vero细胞适应株中的应用。

4、如权利要求1所述乙型流感病毒Vero细胞高产适应株在制备乙型流感灭活疫苗

中的应用。

5、一种用权利要求1所述乙型流感病毒Vero细胞高产适应株制备乙型流感病毒

Vero细胞适应株的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)以保藏号为CGMCCNo.2931的乙型流感病毒Vero细胞高产适应株作为供体株，

并与流行的乙型流感病毒Victoria谱系的毒株进行混合；

2)将上述混合物接种于9～10日龄SPF鸡胚或者Vero细胞或者MDCK细胞上，其

中：接种SPF鸡胚时，每胚接种0.1-0.3ml，于33±1℃孵育12-48h，2-8℃过夜冷胚，

收集鸡胚尿囊液即为病毒收获液；接种Vero细胞时，每个小方瓶接种量为0.05-

0.2ml，置于33±1℃培养48-96h，收获病毒液；接种MDCK细胞时，每个小方瓶

接种量为0.05-0.2ml，置于33±1℃培养48-96h，收获病毒液；

3)在2)步骤收获