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肿瘤相关巨噬细胞模型建立的实验研究

张国良;刘鹥雯;何怡青;杨翠霞;王文涓;杜艳;高锋

【摘要】目的建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的体外分化模型.方法分离健康人外

周血单核细胞进行体外培养;经白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激后,

利用流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD204、CD206的表达改变;利用酶

联免疫吸附试验(ELISA)检测单核细胞白细胞介素10(IL-10)分泌量的改变;继而将

刺激后的单核细胞与肿瘤细胞共培养,采用Hoechst染色观察其对肿瘤细胞的杀伤

情况.结果经IL-4和IL-13刺激后,单核细胞表面CD14的表达率未发生明显变化,

而CD204和CD206的表达显著增高,同时IL-10的分泌量也显著增高;与肿瘤细胞

共培养结果显示,经IL-4/IL-13刺激的单核细胞对肿瘤细胞的杀伤能力显著下降.结

论IL-4/IL-13可在体外诱导单核细胞呈现TAM的表型和功能,适用于TAM分化模

型的建立,该模型可应用于针对TAM的相关研究.

【期刊名称】《检验医学》

【年(卷),期】2014(029)009

【总页数】6页(P897-902)

【关键词】肿瘤相关巨噬细胞;白细胞介素4;白细胞介素13;单核细胞;M2型巨噬

细胞

【作者】张国良;刘鹥雯;何怡青;杨翠霞;王文涓;杜艳;高锋

【作者单位】上海交通大学附属第六人民医院中心实验室,上海200233;上海交通

大学附属第六人民医院中心实验室,上海200233;上海交通大学附属第六人民医院

中心实验室,上海200233;上海交通大学附属第六人民医院中心实验室,上海

200233;上海交通大学附属第六人民医院中心实验室,上海200233;上海交通大学

附属第六人民医院中心实验室,上海200233;上海交通大学附属第六人民医院中心

实验室,上海200233

【正文语种】中文

【中图分类】R446.61

恶性肿瘤发生时，外周血单核细胞浸润至肿瘤间质，逐步被诱导分化为肿瘤相关巨

噬细胞(tumor-associatedmacrophage，TAM)。近年研究发现TAM不具有杀

伤肿瘤细胞的功能，反而能促进肿瘤生长和发展，其表型特征和功能与M2型巨

噬细胞极为相似，是一种“促进肿瘤进展的M2型巨噬细胞”［1］。TAM是肿

瘤间质中的主要免疫细胞，临床研究表明TAM数量与肿瘤患者的预后呈负相关

［2］，利用基因或治疗性方法清除肿瘤局部的TAM将会抑制肿瘤进展［3-4］。

然而，目前缺少一种理想的TAM细胞模型来进行相关机制的研究。

在研究TAM与肿瘤细胞相互作用机制的体外试验中，目前应用最多的是利用佛波

酯(phorbolmyristateacetate，PMA)、白细胞介素4(interleukin4，IL-4)和白

细胞介素13(interleukin13，IL-13)诱导的THP-1细胞作为TAM模型。在本研

究中，我们利用IL-4和IL-13刺激新鲜分离的人外周血单核细胞，通过检测单核

细胞表面的分子标志(CD14、CD204和CD206)、分泌的细胞因子及其杀伤功能

的变化来确定其是否分化为TAM，以探索能模拟肿瘤微环境中TAM的细胞模型，

便于展开相关研究。

材料和方法

一、试剂和仪器

人乳腺癌细胞株BT-549(中国科学院典型培养物保藏中心);RPMI1640培养液、胎

牛血清(Gibco，美国);别藻蓝蛋白(allophycocyanin，APC)-抗CD14抗体及同型

对照抗体、白细胞介素10(interleukin10，IL-10)酶联免疫吸附试验(enzyme-

linkedimmunosorbentassay，ELISA)检测试剂盒(eBioscience，美国)，藻红

蛋白(phycoerythrin