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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN102719459A
(43)申请公布日2012.10.10
(21)申请号CN201210141944.1
(22)申请日2012.05.02
(71)申请人中国热带农业科学院热带生物技术研究所
地址571101海南省海口市学院路4号中国热带农业科学院热带生物技术研究所
(72)发明人张爱联张泽华张添元易国辉
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
C12N15/56
C12N15/75
C12N15/81
C12N1/21
C12N1/19
C12N9/42
C12R1/125
C12R1/84
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶
和β-葡萄糖苷酶的方法
(57)摘要
本发明公开了生产葡聚糖内切酶、
葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法。属
生物技术领域。首先克隆木霉的葡聚糖内
切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β-葡萄糖
苷酶基因；构建含这三种酶基因表达框架
的枯草芽孢杆菌表达载体和毕赤酵母表达
载体；将表达载体转化相应的宿主菌；分
别筛选高表达葡聚糖内切酶、葡聚糖外切
酶和β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌重组子
和毕赤酵母重组子作为工程菌。发酵枯草
芽孢杆菌工程菌和毕赤酵母工程菌生产的
重组混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和
β-葡萄糖苷酶。本发明解决了用天然菌株
生产混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和
β-葡萄糖苷酶中遗留的酶产量低的关键问
题，有利于降低其酶产品的价格。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法。其特征在于：通过分
子生物学技术克隆木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因
和β-葡萄糖苷酶基因，构建含木霉的葡聚糖内切酶基因表达框架、
葡聚糖外切酶基因表达框架和β-葡萄糖苷酶基因表达框架的枯
草芽孢杆菌表达载体和毕赤酵母表达载体；将枯草芽孢杆菌表达载体转化枯
草芽孢杆菌从而获得枯草芽孢杆菌重组子、将毕赤酵母表达载体
转化毕赤酵母从而获得毕赤酵母重组子；分别筛选高达以上所述
的三种酶的枯草芽孢杆菌重组子和毕赤酵母重组子作为含木霉的葡聚糖
内切酶基因表达框架、葡聚糖外切酶基因表达框架和β-葡萄糖苷酶基因表
达框架的枯草芽孢杆菌工程菌和毕赤酵母工程菌；用含木霉的葡聚
糖内切酶基因表达框架、葡聚糖外切酶基因表达框架和β-葡萄
糖苷酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌工程菌和毕赤酵母工程菌生产重组混
合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶。
2.根据权利要求1所述的生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法，
其特征在于：利用权利要求1所述的生产葡聚糖内切酶、葡聚
糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法制备重组混合葡聚糖内切酶、葡
聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶产品。
说明书
p技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及构建微生物工程菌生产重组蛋白的方法。具体是应
用微生物工程菌生
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