单克隆抗体技术(文献综述) .pdfVIP

文献综述—

单克隆抗体技术的原理、发展与主要的实验步骤

1.单克隆抗体制备的基本原理

经免疫的动物产生的致敏B淋巴细胞能分泌特异性的抗体，但这些细胞不能

在体外长期存活；而骨髓瘤细胞则可以在体外大量地、无限地繁殖，但不能分泌

特异性的抗体。如果应用杂交瘤技术使骨髓瘤细胞与那些能分泌特异性抗体的细

胞相融合，那么得到的杂交瘤细胞（hybridomacell）将同时具有两种亲本细胞

的特性：既能够象肿瘤细胞那样无限繁殖，又具有B淋巴细胞的不断分泌抗体的

能力。根据克隆选择学说，由于每个致敏的B淋巴细胞只能针对同一抗原决定簇

产生同种的、完全一样的抗体，所以经过克隆化的杂交瘤细胞就能够分泌对某一

抗原决定簇具有特异性的单克隆抗体。这就是单克隆抗体制备的基本原理。

2.单克隆抗体技术的诞生、发展和展望

1975年，GeorgeKohler和CesarMilstein在Nature上发表了一篇文章，

第一次描述了一种获得单克隆抗体的方法。他们所创立单克隆抗体技术给免疫学

乃至整个生物医学领域带来了一次巨大的革命。Kohler和Milstein也因此而

荣获1984年诺贝尔奖。

单克隆抗体技术诞生后，立即引起了许多研究者的注意，人们纷纷投入这一

崭新领域的研究。经过多年的发展，到二十世纪八十年代中期，单克隆抗体技术

已日臻完善，单克隆抗体也开始广泛应用于生物医学研究和生物技术的各个领

域，以及临床诊断和治疗的许多领域。

最初，单克隆抗体技术是以小鼠－小鼠杂交瘤为研究的中心而发展起来的。

由于小鼠源性的单克隆抗体在生产与应用中有其内在的缺点，八十年代后，小

鼠－大鼠、大鼠－大鼠、小鼠－人以及人－人杂交瘤技术也被尝试并取得了不同

程度的成功,有力地推动了单克隆抗体技术的发展和生物医学研究的深入。尽管

早有准备,单克隆抗体技术的影响之深远还是大大超出了人们的预想：在八十年

代中到九十年代末的短短十多年中，为了满足临床诊断和治疗的需要，双特异性

抗体技术及人－鼠嵌合抗体技术、人源化抗体技术、小分子抗体技术、植物基因

工程抗体技术、抗体酶技术、抗体库(噬菌体显示）技术、外因鼠(XenoMouse)

技术等基因工程抗体技术在经典单克隆抗体技术的基础上也被创立并得到了突

飞猛进的发展。

2000年，随着人类基因组草图绘制的完成，生命科学的发展将进入后基因

组时代，蛋白组的研究将成为生物医学领域的热点。可以肯定，在未来的十多年

内，人们对各种单克隆抗体的需求会持续增长。这是因为人们需要抗体来检测、

纯化和鉴定由这些基因所编码的蛋白质。我们相信，这种需求将会有力地推动单

克隆抗体技术和基因工程抗体技术向前发展。

3.经典的单克隆抗体技术－技术路线与主要步骤

单克隆抗体技术自问世以来经过无数研究者的不断改进，现在已发展成为一

门相当成熟的技术。虽然单克隆抗体技术的内容丰富多彩，各个实验室使用的程

序也不尽相同，但它的基本技术路线却是极为相似的。其主要步骤包括：动物的

免疫、细胞融合、抗体的检测、抗体阳性细胞的克隆化培养与冻存、单克隆抗体

的生产及单克隆抗体的鉴定等。

3.1动物（小鼠）的免疫

单克隆抗体的制备是从免疫小鼠开始的。应指出的是，免疫效果的好坏对于

单克隆抗体研制的成功与否具有举足轻重的影响。为了获得良好的免疫效果，首

先必须制备合适的抗原。虽然用不纯的抗原来免疫也能制备出所需的单抗，但高

纯度的抗原可提高杂交瘤的阳性率，从而大大减轻筛选的工作量。所以，在条件

允许的情况下，应尽可能使用高纯度的抗原。其次，还要选择适当的免疫程序，

设计免疫程序时应充分考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫次数与间隔时间

及选用的动物对该抗原的免疫应答能力等因素的影响。最后，要正确使用免疫佐

剂。

免疫佐剂能大大增强免疫系统对异物（抗原）的应答，所以即使注射较少的

抗原也能得到很高的抗体滴度，获得令人满意的免疫效果。佐剂起作用的方式有

三种,一是在注射部位形成一个抗原沉积库，使抗原能够在一个较长的时期内慢

慢地、持续地释放；二是佐剂能作为运输工具将抗原运送到免疫器官如脾脏、淋

巴结等从而提高了抗原的利用率。三是佐剂中的表面活性剂（乳化性佐剂）、细

菌成分等能够直接或间接激活免疫系统中的各种细胞，特别是巨噬细胞从而大大

增强了免疫应答的强度。很多物质都可以作为免疫佐剂，如小分子肽的衍生物、

无机化合物(氢氧化铝)、细菌的内毒素、特殊的寡聚核酸、植物凝集素等