简介单克隆抗体技术及其人源化技术 .pdfVIP

简介单克隆抗体技术及其人源化技术

摘要：单克隆抗体从问世到目前广泛应用于临床，经历了一段曲折的发展历程，其中人源

化抗体是一个重要的里程碑。鼠源性mAb由于可引起免疫反应而削弱其疗效，因而逐渐被

人源化mAb所取代，甚至出现全人mAb取代人源化mAb的趋势。本文主要介绍了全人

mAb的生产方法之一，转基因小鼠技术，并对该项技术的应用作了些展望。

关键词：单克隆抗体；人源化；转基因小鼠；Cre/LoxP

Abstract:Afteritsadvent,monoclonalantibodyhasgoneanunevenwaytoitspresent

wideapplicationsinclinicalpractices,duringwhichthehumanizedantibodysetan

importantmilestone.MurinemAbsaretrendedtobereplacedbyhumanizedmAbsor

evenhumanmAbsasmurinemAbs’immuno-sideeffectsmayreducetherapeuticeffects.

Thepaperbrieflyintroducestansgenicmicetechnologyasoneofgeneratinghuman

mAbsmethodsaswellassharesomeprospects.

KeyWords:MonoclonalAntibody(mAb);Humanization;TransgenicMice;Cre/LoxP

一、单克隆抗体背景介绍

从1975年英国学者Milstein和德国学者Kohler利用小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫

[1]

的小鼠脾细胞融合，形成了可产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，该细胞既能产生抗体，又可

无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。单克隆抗体在医学、生物学、免疫学等诸多

学科中发挥了巨大的作用。

单克隆抗体不仅可用于分析抗原的结构及检验抗原抗体未知的机理关系，还可用于分

离、纯化特定分子抗原，甚至用于临床疾病的诊断和治疗等。1989年Huse等首次构建了

抗体基因库，从而使抗体研究从细胞水平进入到分子水平，并推动了第三代抗体-基因工程

抗体技术的发展。

二、鼠源单克隆抗体的制备及其特性

鼠源性单抗的制备，一般程序为从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠，获取脾细胞，再

与骨髓瘤细胞融合，最后对已筛选出的单个细胞进行鉴定和克隆，培养出能分泌单抗的克隆

细胞。目前所生产的单抗大多数是鼠源性的，在临床应用方面还存在着很大的弊端，主要是

鼠源单抗与NK等免疫细胞表面Fc段受体亲和力弱，产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒

作用(ADCC)作用较弱，而且它与人补体成分结合能力低，对肿瘤细胞的杀伤能力较弱，并

且鼠源性抗体在人血循环中的半衰期短，它发挥ADCC作用的时间较短；其次鼠单克隆抗

体还具有免疫原性，易使宿主引起过敏反应。这样，一方面降低了单抗的效价，另一方面又

会给病人带来严重的后果。

鼠源性抗体作为异种蛋白应用于人体可引起免疫反应，产生人抗鼠抗体（human

[2]

anti-mouseantibody,HAMA），很大程度上限制了mAbs的临床应用。此外，鼠源性mAbs

[3]

不能与人类抗体FcRn结合。为了克服以上这些问题，鼠源性单克隆抗体还应进一步改善

才能广泛应用于临床。

三、单克隆抗体药物的发展进程（图1）

1975年，Kohler与Milstein通过杂交瘤细胞技术，获取了历史上第一株能分泌抗体且

无限增殖的细胞。11年后，在1986年，FDA批准了第一例使用现代生物技术生产的治疗

性单抗药物OrthocloneOKT3（鼠源单抗-CD3），这个药物可用于治疗器官移植产生的急性

排异症。

8年后，FDA及生物学界已经意识到使用于患者的鼠源抗体所引发的免疫原性，其能

导致迅速降解、药效下降以及提高排异反应的风险。因此基于这样的负面作用，生物技术和

医药公司着力于使用分子生物技术工具来改造