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黑种草籽调节黑素合成的药效物质基础

范雪琦;徐建国;廖莎;周佳;杨伟峻;尚靖

【摘要】以高效液相色谱(HPLC)法对黑种草籽不同体积分数的醇提取物进行色谱

峰表征,以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,采用MTT法测定黑种草籽不同

体积分数的醇提取物对B16黑素瘤细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定黑种

草籽不同体积分数的醇提取物对B16黑素瘤细胞酪氨酸活性的影响,采用NaOH裂

解法测定黑种草籽不同体积分数的醇提取物对B16黑素瘤细胞黑色素含量的影响,

并结合药理研究结果对不同体积分数醇提取物的HPLC图谱进行相关性统计分析.

实验结果表明:黑种草籽体积分数为50%的乙醇提取物具有促进小鼠黑素瘤细胞

B16增殖及促进黑素合成的作用；谱效分析HPLC图谱中的6个色谱峰对药效的

贡献度无差异,表明黑种草籽药效是中药多组分协同作用.

【期刊名称】《吉林大学学报（理学版）》

【年(卷),期】2011(049)004

【总页数】5页(P787-791)

【关键词】黑种草籽;细胞增殖;酪氨酸酶活;黑素合成;相关分析

【作者】范雪琦;徐建国;廖莎;周佳;杨伟峻;尚靖

【作者单位】中国药科大学新药筛选中心,南京210009;新疆维吾尔自治区卫生厅,

乌鲁木齐830001;中国药科大学新药筛选中心,南京210009;中国药科大学新药筛

选中心,南京210009;新疆维吾尔自治区药物研究所,乌鲁木齐830004;中国药科大

学新药筛选中心,南京210009

【正文语种】中文

【中图分类】R965.1

黑种草(NigelladamascenaL.)是黑种草属毛茛科金莲花亚科植物,其种子是常用

的药材[1].黑种草籽的化学成分有山奈酚、槲皮素、黑种草素、百里醌和黑种草

酮,此外还含有多种氨基酸和脂肪油.研究表明,黑种草籽具有多种生理活性[2-17],

如抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗血小板聚集、降脂、降糖和保肝作用等.瘤果黑

种草籽已经作为维药材收入《中华人民共和国药典》和《中国民族药志》.在新药

筛选过程中,常应用细胞系研究药物的功效测定.目前黑种草籽对小鼠黑素瘤细胞

黑素合成的影响尚未见文献报道.本文结合药物分析技术,以常用于临床增加黑素

含量的药物补骨脂素(Psoralen)为阳性药,通过对黑种草籽不同体积分数的醇

提取物进行HPLC色谱图谱研究,并将药效研究数据与色谱峰进行相关性分析,为

探讨黑种草籽的药效提供理论参考.

1仪器与材料

1.1仪器

超净工作台(苏州艾可林净化设备有限公司);IX71倒置荧光相差显微镜(日本

Olympus公司);BB16型二氧化碳培养箱(德国Hearous公司);HH-4数显恒温水

浴锅(国华电器有限公司);0412-1型离心机(上海手术器械厂);1K15高速离心机

(美国Sigma公司);XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);BS210S电子天平

(德国Sartorius公司);Milli-Q自动纯水机(美国Millipore公司);Safire2型微孔板

测读仪(瑞士TECAN公司);岛津液相仪(2010cht日本岛津公司);色谱柱(中国

DIKMA公司,Diamonsil(R)钻石,C18,5μm)等.

1.2试剂

DMEM培养基(美国Gibco公司);胎牛血清(美国Gibco公司);L-DOPA(美国

Sigma公司);MTT(四甲基偶氮唑蓝,上海华舜生物有限公司);胰蛋白酶(美国

Sigma公司);补骨脂素(美国Sigma公司);黑素标准品(美国Sigma公司);

DMSO(美国Sigma公司);BCA蛋白定量试剂盒(上海碧云天公司)等.

1.3细胞

小鼠B16黑素瘤细胞(中国药科大学新药筛选中心细胞库冻存).

1.4待测物

黑种草籽体积分数为50%的乙醇提取物(A)和黑种草籽体积分数为95%的乙醇提取

物(B)(新疆德泓生物科技公司).将A,B先用DMSO溶解,再用DMEM稀释成贮存

液,避光保存在-20℃,临用前用新鲜培养基调制终质量浓度.

2方法

2.1色谱条件

色谱柱：DIKMA,