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２３卷第１期ＣｈｉｎＪＯｙｇａｎｌ＂ｒａｎｓｐｈｎｔ，Ｊａｎ２００２Ｖｏｌ２３，０

抗独特型抗体抑制排斥反应的实验研究

杨雁是李开宗窭科峰

我们运用抗独特型抗体诱导的方取血清检测Ａｂ２将生物素酰一Ｎ羟基表明Ａｂ１ＫＬＨ联合福氏佐剂免疫小鼠

法，在移植受者体内诱导产生与移植物ｒ二酰亚胺酯（ＢＮＨＳＳｉｇｍａ）交联Ａｂ１诱导产生Ａｂ２的方法是成功的。

抗原具有相同抗原眭的抗独特型抗体，后分装备用，用Ａｂｌ（１０￣ｇ／ｍＬ）包被Ａｂ２诱导组单向混合淋巴细胞反应

观察其对排斥反应的抑制作用：ＥＩｌＳＡ板４℃过夜，加１％：Ｉｋ％＇ｋ－ＰＩ３＆的吸光度值为０．２４±０．０３对照组为

材料与方法

一１ｅｅ￣．Ｏ，于３７℃封闭ｈ１依次加入Ｉ０３５±００４．二者的差异具有显著性（尸

Ｉ动物：Ｂａ］ｂ／ｃ（ＨＩ２】、ｃ５７ＢＬ／６：５ｏ免疫鼠血清或对照血清３７℃２ｈ：２＜００５）。

（Ｈ．２）近交系小鼠，雌性．５～７周．体重

ｉｔｇ／ｍｌＡｂｌ—ＢＮＨＳ变联物３７℃ｌｈ；Ｉ：Ａｂ２诱导组心肌移植物存活时间为

（２０±２１ｇ购自陕西省中医研究院实验

０００１ＡＢＣ３７℃ｊｈ，底物四甲基聪苯（３２１＝１９）ｄ（组为（１３５±２３）

动物中一

胺，３７℃３０ｍｉｎ；最后２ｍｏｔ／ＬＨｚＳＯ４ｄ，正常组为（９５１７）ｄ，Ａｂ２诱导组移

！方法：

（５Ｏ１／孑Ｌ）终止反应，测定４５０ｎｍ的吸植物存活时间与对照组相比，差异有显

（Ｉ）抗同种异品系抗体（Ａｂ１）的诱

光度。著性（尸＜００５）。

导：取Ｃ５７ＢＬ／６小鼠的脾细胞低渗法

（４）单向混合淋巴细胞反应：经丝裂三、讨论

去陈红细胞后用丝裂霉素ｃ（Ｋｙｏｗａ

霉素ｃ（２５／￣ｇ／ｍｌ，３７℃水浴４５ｍｔｎ）处本研究有如下特点：（１）我们选用脾

ｋｋｏＫｏｇｙｏＣｏ１Ｉｄ．２５，ｕｇ／ｍ１）干

３７、水懵处理４５ｍｉｎ洗涤３～５遍后理的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞作为刺激细细胞作为始动抗原．能够在移植受者体

按２２／１０／只经腹腔免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，胞诱导Ａｂ２的Ｂａｂ／ｃ小鼠脾细［胞作为内诱导产生针对多种移植抗原的多克隆

常规免捩３政．间隔２周，末孜免疫３ｄ反应细胞，分别悬浮于含２０％胎牛血清抗独特型抗体，以便更有效地抑制排斥

后，取其血清。随后取７ＢＬ／６小鼠胸的ＲＰＭ１６Ｉ４０培养液中，调整细胞浓度反应；（２）由移植受者悻内诱导产生的抗

腺细胞，固定后分别加入不同稀释度的为５×ｊ０。／ｍｌ。９６孔板中每Ｌ加＾１００独特型抗体，不仅能够阻止移植抗原对

多克隆杭ⅡＬ『清，之后加＾羊抗小鼠一１反应细胞、１００１刺激细胞，在３７℃、受者免疫系统的活化，在移植排斥应答

ＨＨ’武议博士德公司（），采用间接荧光含体积分数为５％的Ｏ０２条件下培养，４的抗原识别阶段起到抑制作用而且还

染色法测定Ａｂｌ效价。ｄ后，以噻唑蓝比色法检测５７（１ｌｌｒｌｌ的吸可封闭杀伤胜Ｔ淋巴细胞和抗移植物