负载LMP-1基因的树突状细胞诱导CTL对鼻咽癌细胞的杀伤效应 .pdfVIP

负载LMP-1基因的树突状细胞诱导CTL对鼻咽癌细胞的杀

伤效应

徐瑞凤;石敏;尤长宣;吕成伟;罗荣城;廖旺军

【摘要】目的:探讨超声联合微泡造影剂能否增强绿色荧光蛋白(GFP)质粒pEGFP-

C3-LMP-1转染树突状细胞(Dendriticcells,DC),进而探讨转染LMP-1基因的DC

诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对鼻咽癌(NPC)细胞株的体外杀伤作用.方法:体外培

养的人DC分为四组:①单纯质粒组(A组):加入质粒;②超声照射组(B组):质粒+超声

辐照;③微泡造影剂组(C组):质粒+微泡造影剂;④超声+微泡造影剂组(D组):质粒+

微泡造影剂+超声辐照.荧光显微镜观察GFP质粒在DC内的表达,流式细胞仪评价

GFP质粒的转染效率.另将体外培养的DC分为两组用于检测DC表面表型的表达

及体外杀伤实验:①空白对照组,单纯培养的DC;②基因转染组,具体实验方法同上述

D组.流式细胞仪检测DC表面分子表型的表达.DC和T细胞混合共培养获得的

CTL为效应细胞,LMP-1表达阳性的NPC细胞株C666-1为靶细胞,按效靶比10:1

的比例混合培养24h后,MTT法检测CTL对靶细胞的杀伤作用.结果:D组DC内有

较多的绿色荧光表达,且转染效率最高(14.86±2.36)%,和其余各组均有显著性差

异.LMP-1基因转染组DC表面标志CD80、CD83、CD86、CD40、HLA-DR的

表达明显高于对照组,所诱导产生CTL对靶细胞有明显的杀伤作用,其杀伤效率为

(41.72±3.53)%,明显高于空白对照组(7.62±2.36)%.结论:超声联合微泡造影剂可有

效地介导GFP质粒转染DC.LMP-1基因转染组DC诱导产生特异性的CTL对靶细

胞有明显的杀伤作用.

【期刊名称】《河北医学》

【年(卷),期】2010(016)012

【总页数】5页(P1409-1413)

【关键词】超声微泡造影剂;树突状细胞;基因转染;鼻咽癌;免疫治疗

【作者】徐瑞凤;石敏;尤长宣;吕成伟;罗荣城;廖旺军

【作者单位】南方医科大学南方医院肿瘤中心,广东,广州,510515;南方医科大学南

方医院肿瘤中心,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院肿瘤中心,广东,广

州,510515;南方医科大学南方医院肿瘤中心,广东,广州,510515;南方医科大学南方

医院肿瘤中心,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院肿瘤中心,广东,广

州,510515

【正文语种】中文

【中图分类】R73

目前,以放化疗相结合的综合治疗是鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)的

有效治疗手段,但仍有约40%-50%患者出现局部复发和远处转移。对于治疗失败

的患者,寻找新的治疗方法显得尤为重要。研究表明NPC患者的树突状细胞

(Dendriticcells,DC)数目有限,免疫功能低下,无法有效地处理和递呈肿瘤抗原可能

是肿瘤逃避机体免疫监视的主要原因[1]。以DC疫苗为代表的细胞免疫治疗给常

规放化疗治疗失败的NPC患者带来了希望。然而如何安全、高效的将目的基因转

染DC是制备DC疫苗的瓶颈之一。本实验探讨超声及微泡造影剂介导基因转染

DC的有效性,并进一步观察LMP-1为靶点的DC疫苗对LMP-1阳性NPC细胞株

C666-1的体外杀伤作用。

1材料与方法

1材料与仪器:重组人白细胞介素2(IL-2)、重组人白细胞介素4(IL-4)、重组人白细

胞介素7(IL-7)、重组人粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子

(TNF-α)购自Sigma公司;AIM-V培养基购自GIBCO公司;淋巴细胞分离液购自天

津血液研究所;质粒提取试剂盒购自Invitrogen公司;超声微泡造影剂声诺维(Sono

Vue)为意大利Bracco公司产品。荧光标记鼠抗人单克隆抗体CD80、CD83、

CD86、CD40、HLA-DR为美国BD公司产品。绿色荧光蛋白(GFP)质粒pEGFP-

C3-LMP-1、NPC细胞株C666-1、Ecoli