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鸽圆环病毒感染诊断技术规范

1范围

本文件规定了鸽圆环病毒感染引起的流行病学、临床症状、病理变化等临床诊断，样品采集与处理及实验室诊断技术要求和操作规范。

本文件适用于鸽圆环病毒的核酸、抗体的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19289实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列略语适用于本文件。

EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

5诊断依据

5.1病原学

鸽圆环病毒隶属于圆环病毒科，单股、负链环状DNA病毒，基因组大小为2031~2039nt。基因组包含2个主要的开放阅读框:ORF1和ORF2，分别编码复制相关蛋白（Rep）和唯一的结构蛋白（Cap）。

5.2流行病学

鸽圆环病毒病暴发时，多数情况下表现为高发病率和低死亡率，死亡率在1%～100%。12月龄以下的青年鸽易感，4月龄以下幼鸽最易感。主要通过鸽与鸽之间相互接触传播，也可经由污染的饲料、饮水、用具等引起鸽感染，种蛋也可传播该病。主要表现为感染鸽体弱，引起免疫抑制导致其他疫病发病率和死亡率升高。

5.3临床症状

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5.3.1典型症状

死亡率取决于感染鸽的年龄及有无混合感染。感染的临床症状表现多样，大多数报道的临床症状为生长障碍和腹泻。病鸽典型症状为精神萎顿、缩颈、食欲减退、衰弱、消瘦而体重减轻、腹泻乃至呼吸困难等。

5.3.2非典型症状

不典型发病，表现为翅膀、尾、羽毛进行性营养不良、大量脱落和喙变形的临床症状。

5.4病理变化

5.4.1鸽圆环病毒主要损害鸽法氏囊，可致患鸽法氏囊出现坏死、萎缩。有的损伤胸腺，病变呈深褐色。肝、肾肿大、变黄、质脆，胃肠道和肌肉由于贫血而苍白，并伴有点状出血。其他病理学变化包括坏死性喉气管炎、慢性支气管炎、坏死性肠炎、纤维素性肺泡炎、肝炎等。

5.4.2组织病理学观察，可见初级和次级淋巴组织增生和坏死，有时可见脾脏淋巴滤泡增生，散在淋巴细胞不同程度的坏死。法氏囊细胞中可见胞浆和胞核包涵体，肠、支气管等相关淋巴组织及羽毛和羽毛囊上皮细胞中也可见到包涵体。病鸽骨髓、肝、胰、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、嗉囊肌层中有淋巴细胞浸润。病毒感染不影响鸽血液中的红细胞数量、血红蛋白及总蛋白的含量，但白细胞数量变化较大。

5.5实验室检测

5.5.1鸽圆环病毒检测样品的采集与处理，具体操作参见附录A。

5.5.2鸽圆环病毒聚合酶链式反应检测（PCR），具体操作参见附录B。

5.5.3鸽圆环病毒SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测，具体操作参见附录C。

6诊断原则

鸽圆环病毒感染的诊断是以病原学检查为主，结合流行病学史、临床表现、病理变化等进行综合分析做出诊断。流行病学史和临床表现是该病诊断的重要依据，但不是必要条件，病理变化也只是辅助诊断依据。病例确诊需严格的病原学检测证据。

7诊断判定

7.1鸽圆环病毒感染疑似病例

具备5.3或5.4中的任一项。

7.2鸽圆环病毒感染确诊病例

5.5.2或5.5.3中核酸检测阳性的鸽圆环病毒疑似病例。

7.3鸽圆环病毒感染排除病例

死亡病鸽的内脏（法氏囊、肝和脾）或粪便样品核酸检测阴性（5.5.2、5.5.3），并经至少两个实验室证实，可排除鸽圆环病毒。

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附录A

（规范性附录）

样品收集及处理

A.1实验材料

A.1.1仪器

台式离心机（最高离心速度不低于5000r/min）、组织匀浆器、研钵、生物安全柜仪、涡旋混合振荡器、冰箱（2℃~8℃、-20℃、-80℃)、高速台式冷冻离心机（最高离心速度不低于12000r/min）、单道（或多道）微量移液器。

A.1.2耗材

离心管（1.5mL、2mL、15mL、50mL）、采样管（5mL）、剪刀（含弯头剪刀）、镊子（含弯头镊子）、采样专用商品化棉拭子、一次性采血管（含针头）、注射器（1mL、5mL、10mL）、标签、记号笔。

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