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免疫磁珠分选法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞

周玲萍;冯成;汤雪斌;徐红蕾

【摘要】目的：探讨一种高效、稳定的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）原代

培养方法。方法：选取45只1周龄Balb/c小鼠,随机分成3组,分别用酶消化法、

组织贴块法、免疫磁珠分选法3种方法分离培养小鼠PMVECs,观察细胞形态学以

及VIII因子相关抗原免疫荧光染色鉴定内皮细胞,计算各组原代培养成功率及从原

代培养开始到首次传代所需时间,测定细胞纯度,MTT法绘制生长曲线。结果：3组

原代培养的细胞在倒置显微镜下均能见到短梭形、多边形的微血管内皮细胞,血管

内皮细胞特异性标志物VIII因子相关抗原表达阳性。免疫磁珠分选法组原代培养

成功率及细胞活性显著高于其他2组,差异有统计学意义（P〈0.01）,从原代培养

至首次传代所需的时间短于组织贴块法组,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞纯

度显著高于酶消化法组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：相比于酶消化法与

组织贴块法,免疫磁珠分选法原代培养小鼠PMVECs具有重复性好,分离速度快,细

胞纯度高及活性好的优点。

【期刊名称】《温州医科大学学报》

【年(卷),期】2016(046)008

【总页数】4页(P590-593)

【关键词】细胞培养;原代培养;免疫磁珠;肺微血管内皮细胞

【作者】周玲萍;冯成;汤雪斌;徐红蕾

【作者单位】温州医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科,浙江温州325015

【正文语种】中文

【中图分类】R331

建立高效的肺微血管内皮细胞（pulmonarymicrovascularendothelialcells，

PMVECs）体外培养方法对急性肺损伤等疾病发病机制及药物治疗等方面的研究起

着重要作用。目前文献报道体外培养PMVECs的方法主要有酶消化法、组织块培

养法、免疫磁珠分选法，但由于PMVECs较脆弱难成活、生长缓慢、易污染、不

易纯化等原因，目前其培养仍是一个难题。本研究对上述3种PMVECs体外培养

方法进行比较，明确不同培养方法的优缺点，探讨出一种稳定的PMVECs培养方

法。

1.1材料健康1周龄Balb/c小鼠45只，雌雄不限，由温州医科大学实验动物中

心提供。EndothelialCellMedium（Sciencell公司），FBS（Gibco公司），

0.25%胰蛋白酶（Gibco公司），I型胶原酶（Gibco公司），大鼠抗小鼠CD31

单克隆抗体（Invitrogen公司），羊抗大鼠IgG磁珠（NewEngland公司），兔

抗人VIII因子相关抗原多克隆抗体（Santa公司），IV型胶原酶（Gibco公司），

中性蛋白酶（Roche公司），MTT（Sigma公司）。

1.2方法

1.2.1分组与肺组织的分离：取Balb/c小鼠45只，随机分为酶消化法组、组织

贴块法组、免疫磁珠分选法组，每组各15只。用10%水合氯醛（0.35mL/100

g）麻醉后置75%乙醇浸泡消毒3min。将小鼠置无菌操作盘上，用无菌眼科剪、

眼科镊逐层打开胸腔暴露心肺，自右心室心尖处进针缓慢推注10mLDMEM液

（含肝素与双抗），直至肺组织发白。剪取小鼠心肺组织置DMEM液中，移入超

净台内备用。

1.2.2细胞原代培养：酶消化法［2］：超净台内剪取肺组织，加入0.25%胰蛋白

酶5mL消化5min。将周缘肺组织剪碎成尽可能小的组织块。将组织块吸入离心

管中，加入3mLIV型胶原酶（2.25mg/mL），培养箱消化10min。再加入3

mL中性蛋白酶（10mg/mL）消化15min，期间每5min振荡1次。置离心机

上1000r/min离心5min，