脊髓性肌萎缩症单体型连锁分析及单细胞扩增方法的建立及应用研究.pdfVIP

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脊髓性肌萎缩症单体型连锁分析和单细胞扩增

方法的建立及应用研究

研究生：苏峻峰

导师：王柠教授

吴志英教授

摘要

目的：l、优化脊髓性肌萎缩症(sMA)产前基因诊断体系。

2、建立单细胞扩增技术平台。

3、应用单细胞扩增方法对SMA进行基因诊断研究。

方法：1、应用聚合酶链反应一聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)技术对和运动神经元生存

基因(SMN)紧密连锁的短串联重复(STR)位点进行等位频率分析。

描技术对SMA家系进行产前诊断。

3、应用巢式PCR、引物延伸预扩增(PEP)及荧光PCR对单个淋巴细胞进行扩增。

4、应用PCR一限制性酶切技术对正常人及SMA患者单个淋巴细胞进行SMNI缺失检测。

结果：1、从11个与s州基因连锁的STR位点中优选出了3个多态信息含量丰富、杂合率

高的位点。

析，并联合应用基因扫描、PcR一限制性酶切及DHPLC进行产前基因诊断，结果

准确、可靠。

85％。

3、用巢式PCR、引物延伸预扩增法扩增单细胞，扩增率分别为90％_币IJ

性酶切，结果和从全血中抽提DNA后PCR一限制性酶切结果一致。

结论：l、联合PCR一限制性酶切、DHPLC、

STR连锁分析及基因扫描技术使SMA产前诊断

结果更准确、可靠。

脊髓性肌萎缩症单体型连锁分析和单细胞扩增方法的建立及应用研究摘要

2、用单细胞PCR一限制性酶切方法可以对SMA患者进行基因诊断，为$MA植入前诊

断奠定了基础，并为其它的神经遗传病植入前诊断提供了技术支持。

关键词：脊髓性肌萎缩症(SMA)；短串联重复序列(STR)；单体型连锁分析

单细胞扩增；基因扫描

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ofand

andAnalysis

EstablishmentHaplotype

Application

PCRinMuseular

CellAtrophy

SingleSpinal

MasterSu

Candidate：Jun—feng

Wang

Supervisors：Prof．Ning

Wu

Prof．Zhi-Ying

Abstract

theofmuscular