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应用农杆菌介导的生长点转化方法建立甜瓜遗传转化技术

郝金凤;荆培培;张丽;哈斯阿古拉

【摘要】Ahigh-frequencytransformationsystemhasbeenestablishedby

Agrobacteriumtumefacienstransfor-mationtechnologyandusing

meristemsofaxillarybudsastransformationreceptor.Externalfactorsthat

affecttheef-ficiencyofgenetictransformationonthebaseofgentamicin

werestudiedandoptimized,suchasthebacterialcon-centrationandthe

timesoftransformationandco-cultivation.Themajorresultswereas

follows:seedlingwasgrownfor20days,thenaxillarybudsexcisedand

stabbedwereinfectedwithAgrobacteriumtumefacienswhichOD600was

0.7for10min.Thenafterco-cultivationfor2days,transformedplants

wereselectedby20mg/Land40mg/Lgen-tamicinontheleavesand

rootingrespectively.ItwasoriginallyprovedbythePCRthatexpression

cassetteshadbeentransferredintothegenome.Thepositive

transformationratewas76%bytheanalysisofPCR.Andthelivingrateof

thetransplantedtransgenicplantswas76.3%.%为探讨甜瓜的遗传转化技术,

以甜瓜品种河套蜜瓜腋芽生长点做外植体,利用庆大霉素基因作为筛选基因,对影响

农杆菌转化的菌液浓度、转化时间、共培养时间进行了正交试验。通过优化转化条

件,建立了农杆菌介导的甜瓜腋芽生长点遗传转化体系。结果表明,采用培养20d

的无菌苗,以腋芽作为外植体,预培养1d；用OD600=0.7的菌液转化10min后,

黑暗中共培养2d,然后用40mg/L庆大霉素进行筛选；移栽后在叶片上喷洒20

mg/L庆大霉素筛选转基因植株,效果最好。通过对庆大霉素抗性苗进行PCR检测,

初步验证外源基因已经整合进甜瓜基因组,转化率达到76%,幼苗移栽成活率为

76.3%。

【期刊名称】《华北农学报》

【年(卷),期】2014(000)002

【总页数】5页(P116-120)

【关键词】甜瓜;植物生长点;遗传转化;农杆菌

【作者】郝金凤;荆培培;张丽;哈斯阿古拉

【作者单位】内蒙古大学生命科学学院，内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术

重点实验室，内蒙古呼和浩特010021;内蒙古大学生命科学学院，内蒙古自治区

牧草与特色作物生物技术重点实验室，内蒙古呼和浩特010021;内蒙古大学生命

科学学院，内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室，内蒙古呼和浩特

010021;内蒙古大学生命科学学院，内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点

实验室，内蒙古呼和浩特010021

【正文语种】中文

【中图分类】S652

20世纪90年代初,转基因技术逐步应用于甜瓜。1990年,Fang等[1]利用根癌农

杆菌侵染甜瓜子叶,成功地将NPTⅡ基因转入了甜瓜(CucumismeloL.)。随后利用

农杆菌介导法转化甜瓜的研究越来越多[2-5],内蒙古自治区牧草与特色作物生物技

术重点实验室分别用农杆菌介导法[6-7]和花粉管通道法[8]转化了甜瓜品种河套蜜

瓜。但这些甜瓜的转化方法都有其不足之处,花粉管通道法受时间和环境条件的限

制,农杆菌介导法转化甜瓜子叶外植体获得的转基因植株移栽成活率低,而且组培过

程中需要脱分化和再分化的