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保健食品增强免疫力的评价方法

一、实验内容：

1.

细胞免疫

2.

体液免疫

3.

非特异性免疫功能

4.NK细胞活性

二、评价指标

1.

体重和免疫脏器重量的测定：

称量实验动物在实验的初,中,终期的体重,测量胸腺和脾脏重量,评价受试动

物的一般情况,脏器/体重比,包括胸腺/体重比,脾脏/体重比

2.

细胞免疫功能测定：

1〕小鼠脾淋巴细胞转化实验

2〕迟发性超敏反响〔DTH

3.

体液免疫功能

1〕抗体生成细胞检测

2〕血清溶血素测定

4.

单核/巨噬细胞功能测定

1〕小鼠廓清实验

2〕小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

5.NK细胞活性测定

三、动物选择

1.

正常或免疫功能低下的模型动物进行实验.

2.一般选择小鼠,品系不限,推荐使用近郊系动物,性别为单一性,6-8W,体

重18-22g0

3.10-15

动物数量每组只,清洁级以上.

四、实验剂量

1.3

至少设个剂量组,另设空白对照组,也可加阳性对照组.

2.

尽可能找出最低有效剂量.

3.3个剂量中,有1个剂量应相当于人体推荐摄入量〔折算为每公斤体重的剂量〕的10

倍

4.30

最高剂量不得高于人体推荐摄入量的倍

5.

剂量必须在毒理学评价的平安剂量范围内

五、实验时间

一般30天

六、结果判定

1.

细胞免疫功能

小鼠脾淋巴细胞转化实验和DTH反响实验结果均为阳性,或其中一个实验的两个

剂量组结果阳性,那么可判定样品具有增强细胞免疫作用

2.

体液免疫功能

抗体生成细胞实验和血清溶血素测定如结果均为阳性,或其中一个实验的2个剂量组结果

阳性,可判定具有增强体液免疫作用.

3.

单核/巨噬细胞功能实验

小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果均为阳性,或其中一

个实验的两个剂量组结果阳性,可判定具有增强非特异性免疫作用

4.NK细胞活性

一个以上剂量组结果阳性,可判定具有增强NK细胞活性作用

5.1-421,2,3

在项实验中,假设有个功能检测呈阳性〔其中应在以上单项功能判定的

根底上〕,可判定该样品具有增强免疫作用.

6.1-4

对任何一项实验,具有抑制作用,可判定该样品具有免疫抑制效应.

七、实验方法

1.

细胞免疫

—小鼠脾淋巴细胞转化一一MTTt放射性核素掺入法

一DTH小应一一耳月中胀法或足足石增厚法

2.

体液免疫

―抗体生成细月fi实验一一Jerne改进玻片法〕

4血清溶血素实验一一血凝法和半数溶血值HD50测定

3.

非特异性免疫

事小鼠碳廓清实验

―小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验一一滴片法或半体内法

5.NK细胞活性

▲乳酸脱氢酶测定〔LDH法和放射性核素3H-TdR

八、法规要求将来可能增加的评价

1.

血液学检查工程

半细胞分化抗原分类检测

4细胞分类计数指标

2.

淋巴细胞转化增殖实验的改进

增加新方法：

45-澳脱氧尿音掺入标记检测细胞增殖动力学指标

手抗增殖细胞核抗原单抗或PCNAfe疫组化染色

-CFSEB记细胞检测细胞增殖水平

4B淋巴细胞对有丝分裂原的反响性〔LPS诱导〕和混合淋巴细胞反响评价

5.

单核/巨噬细胞吞噬功能实验

增加新方法：

4单核/巨噬细胞计数

4单核/巨噬细胞吞噬荧光微球的水平

$单核/巨噬细胞吞噬FITC标记的细菌的功能

半单核/巨噬细胞