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高纯度苦瓜素类化合物的制备技术标准

1范围

本部分规定了高纯度苦瓜素类化合物苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ和苦瓜素L的制备方法。

本标准适用于高纯度苦瓜素类化合物苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ和苦瓜素L的制备方法。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

HY/T229-2018海洋生物活性物质标准样品结构确证方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1高效液相色谱highperformanceliquidchromatography

仪器配置包括：色谱泵及控制器、色谱柱、检测器、进样器、数据处理及控制。以液体为流动相，通过高压输液系统，把不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱

柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

3.2浸提法extractionmethod

用挥发性有机溶剂将原料中的某些成分转移到溶剂相中，然后通过蒸发、蒸馏等手段回收有机溶剂，

而得到所需的较为纯净的萃取组分。

3.3真空抽滤vacuumfiltration

抽滤装置一般由布氏漏斗、抽滤瓶和抽气泵组成。利用抽气泵使抽滤瓶中的压强降低，达到固液分离

的目的的方法。

3.4液质联用highperformanceliquidchromatographymassspectrometry

以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的

质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。

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3.5核磁共振谱nuclearmagneticresonancespectroscopy

研究原子核对射频辐射(Radio-frequencyRadiation)的吸收，它是对各种有机和无机物的成分、结构进

行定性分析的最强有力的工具之一，有时亦可进行定量分析。本方法主要应用氢谱和碳谱鉴定分子结构式。

4试剂耗材、仪器设备

4.1试剂耗材

本方法高效液相色谱系统所使用的试剂均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规

定的一级水。

甲醇、二甲基亚砜DMSO为国产分析纯。

双圈滤纸、0.22μm微孔滤膜、一次性注射器。

4.2仪器设备

高效液相色谱、真空抽滤装置、旋转蒸发仪、冻干机。

5制备流程

5.1样品前处理

新鲜苦瓜茎叶干燥，研磨成粉。

5.2浸提

用甲醇对苦瓜茎叶干粉进行浸提24h，甲醇与苦瓜茎叶干粉的用量比为1:5（g:mL），对浸提液进行

真空抽滤，并通过旋转蒸发仪进行蒸馏浓缩，得到粗提物。

5.3高效液相色谱分离

5.3.1一级高效液相色谱分离

使用甲醇溶解4.2所得到的粗提物，并用0.22μm滤膜进行过滤。对过滤后的粗提物进行一级高效液相色谱分离，分离的的参数为：流动相为80%甲醇、柱温度为28℃、流速为2.5mL/min、分离柱为AgilentXB-C18、检测波长为210nm。分别收集18～26min时间段和30～42min时间段的流出液，通过旋转蒸发

仪进行蒸馏浓缩，并通过冻干机进行冷冻干燥，即得一级分离物1和一级分离物2。

5.3.2二级高效液相色谱分离

使用甲醇溶解4.3.1所得到的一级分离物1和一级分离物2，并用0.22μm滤膜进行过滤。分别对过滤后的一级分离物1和一级分离物2进行二级高效液相色谱分离，分离的参数与一级高效液相色谱分离参与相同。对于一级分离物1分别收18～22min时间段和24～26min时间段的流出液，蒸馏浓缩，冷冻干燥，

得二级分离物1-1和二级分离物1-2，对于一级分离物2收集33～37min时间段的流出液，蒸馏浓缩，冷

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冻干燥，得二级分离物2-1。

5.3.3三级高效液相色谱分离

使用甲醇溶解4.3.2所得到的二级分离物1-1、二级分离物1-2、二级分离物2-1，并用0.22μm滤膜进行过滤。分别对过滤后的二级分离物1-1、二级分离物1-2、二级分离物2-1进行三级高效液相色谱分离，分离的参数与一级高效液相色谱分离参与相同。分别收集20～23min时间段、23～26min时间段以及34~

37min时间段的流出液，蒸馏浓缩，冷冻干燥，分别得到纯度为95%以上的苦瓜素Ⅱ、苦瓜素L和苦瓜素Ⅰ。

6物质鉴