《通用型羊肠道病毒实时荧光定量RT-PCR法》.docxVIP

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ICS

FORMTEXT11.220

CCS

FORMTEXTGXAS

FORMTEXTB41

FORMTEXT团体标准

T/FORMTEXTGXASFORMTEXTXXXX—FORMTEXT2024

FORMTEXT

FORMTEXT通用型羊肠道病毒实时荧光定量RT-PCR法

FORMTEXTUniversaldetectionofcaprineenterovirusbyreal-timefluorescentquantitativeRT-PCR

FORMDROPDOWN

FORMTEXT

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西标准化协会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/XXXXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号T/GXASXXXX—2024

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前言

本文件参照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西兽医协会提出并宣贯。

本文件由广西兽医协会归口。

本文件起草单位：广西悦牧生物科技有限公司、防城港市动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心。

本文件主要起草人：莫模双、谢守玉、张红云、周明旭、黄小洁、潘杰、黄张玲、杨丽雪、欧莹、韦成威、陆春礼、苏子庭、罗湘尹、吕思明、侯慧贤、覃婉婷、赵子欣、陈秋英、黄百花、何晓霞、王露霞、覃海、袁成进、梁星雪、胡艳、段辰星、裴幸彪、曹显永、杨纯兴、肖永祖、王德玺、樊友净、黄景灿、马麟、郑翔、苏文广、孙晓琳、陆海、何凤愿、卢华闪、韦文飞、覃芳芸、熊毅。

通用型羊肠道病毒实时荧光定量RT-PCR法

范围

本文件规定了通用型羊肠道病毒实时荧光RT-PCR法涉及的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤等技术要求。

本文件适用于羊肠道病毒的核酸检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

山羊/绵羊肠道病毒caprine/ovineenterovirus，CEV/OEV

CEV/OEV属于微核糖核酸病毒科肠道病毒属，根据ICTV必威体育精装版分类标准，肠道病毒属分为12个肠道病毒种(A-L)和3个鼻病毒种(A-C)，其中EV-G包括23个亚型。近年来有多个G种肠道病毒感染山羊和绵羊的报道，其中绵羊多为G5和G7亚型，山羊多为G20亚型，是近年来国内外新发现的动物疫病病原，临床上常引起动物呼吸道、消化道疾病以及神经系统紊乱。

荧光报告基团reporter

Reporter是一种特殊的化学物质，它具有荧光特性。在一定的激发条件下，它能够发射出足够的荧光信号，用于监测生物体系中的分子活性、物质变化等。

荧光淬灭基团blackholequencher，BHQ

BHQ是一种能够抑制荧光发射的化合物。通过吸收荧光基团的光能，将其转化为热能或其他形式的能量，从而使荧光基团无法发光。

实时荧光定量RT-PCRreal-timefluorescentquantitativeRT-PCR，qRT-PCR

qRT-PCR是一种基于PCR原理的分子生物学技术，通过检测PCR反应过程中释放的荧光信号来定量检测目标核酸含量。较之传统的定性PCR可以提供更精确、灵敏和可靠的结果。

6-羧基荧光素6-carboxyfluorescein，FAM

一种Reporter，羧基荧光素的一个同分异构体，主要用于核酸的测序和标记。

Ct值cyclethreshold，Ct

Ct值表示检测到靶序列的荧光信号达到设定的阈值所经历的PCR循环数。

原理

根据CEV/OEV基因组序列的保守片段，设计合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记TaqMan探针。TaqMan探针两端分别标记一个荧光发光基团（Reporter）和一个荧光淬灭基团（BHQ）。当PCR扩增时，探针被酶切降解，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，荧光报告基团发出可被仪器