逆境胁迫对植物生理生化指标的影响.docVIP

本科学生综合性实验报告

学号姓名

学院专业、班级

实验课程名称植物生理学实验

教师及职称

开课学期2012至2013学年上学期

填报时间2012年12月15日

云南师范大学教务处编印

逆境胁迫对植物生理生化指标的影响

摘要：对植物产生危害的环境称为逆境，又称胁迫。干旱是制约植物生长的主要逆境因素，以小麦幼苗在模拟干旱胁迫下，植株体内的生理生化指标会发生变化。实验采用PEG处理小麦幼苗，对抗氧化酶；脯氨酸；谷胱甘肽；过氧化氢；可溶性糖；丙二醛在植物体内的含量变化进行了研究，实验通过分光光度计分别在不同的波长中测出吸光率，间接计算出其含量，而通过对正常条件下的和逆境胁迫下一定量小麦体内以上各种物质含量的对比，从而了解小麦体内生理生化指标发生的变化。

关键词：小麦（TriticumaestivumLinn）；干旱胁迫；生理生化

1引言

干旱是自然界常见的逆境胁迫因素，而且干旱也是植物最容易受到的胁迫之一。干旱不仅制约植物的生长发育与产量，也会引起植被结构与功能的时空变化。因此植物对干旱胁迫的适应及机制一直是植物逆境适应策略研究的一个热点【1-3】

作物抗旱性的研究方法有多种，适应能力进行了研究：植物对干旱胁迫的适应过程和受伤害程度与干旱胁迫的强度以及植物自身的抗性紧密联系，并从生化代谢、生理功能、形态适应、生长发育以及生物生产力等多种形式表现出来【1-5】。土壤有效水分状况与植物之间的关系一直是植物生理生态学研究领域的热点问题。大多数植物在短期或轻度土壤缺水情况下叶片水势下降，气孔关闭。限制CO2摄取和光合作用速率：长期严重干旱条件下可限制植物生长,引起形态结构发生变化。甚至导致植物死亡【6】。大多实验是在人工控制的干旱或人工模拟干旱条件下进行。其主要方法是室外盆栽控制水分，苗期室内水培或砂培采用PEG渗透胁迫、人工控制的温室、气候室和培养箱等。其中，PEG渗透胁迫法简单易行、条件容易控制、重复性好、试验周期短。本试验采PEG溶液模拟干旱胁迫的方法，研究干旱胁迫对小麦幼苗发芽率、抗氧化酶、脯氨酸、谷胱甘肽、过氧化氢、可溶性糖、丙二醛等生理生化指标含量的变化，并初步探讨小麦的抗逆机理，期望能够应用于农业生产实践中，为干旱农业生产提供理论依据。

ml→用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。

POD测定：取POD反应混合液（10mol/L愈创木酚，5mol/LH2O2,用PBS溶解）2.95ml，加入酶液50ul（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应1min时的A470。

PPO测定：取PPO反应混合液（20mol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.9ml，加入酶液0.1ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应1min时的A410。

计算：

以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则：

PODactivities=

PODactivities=

(?mol.g-1FWmin-1)

PPOactivities=

PPOactivities=

(U.g-1FW)

ε470=26.6mM-1㎝-1

2.4.6、逆境胁迫和谷胱甘肽(GSH)的含量测定

GSH的提取：分别取0.1g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3mL5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2mL5%TCA洗研钵→5000rpm离心10min→上清液定容至5mL。

测定：上清液各1mL(空白用5%三氯乙酸代替)→分别加入2mL0.1MPBS(pH=7.7)→1mL2mMDTNB→25℃5min→测定A412。

计算：

GSHcontent=

GSHcontent=

(?mol.g-1FW)

ε412=13.6mM-1㎝-1

2.4.7、逆境胁迫和抗坏血酸(ASA)的含量测定

ASA的提取：分别取0.1g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3mL5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2mL5%TCA洗研钵→5000rpm离心10min→上清液定容至5mL。

测定：上清液各0.8mL(空白用5%TCA代替)→分别加入0.8mL0.15MNaH2PO4(pH=7.4)和蒸馏