微生物学实验-水中大肠菌群的简易检测.ppt

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水中细菌总数的测定及

大肠菌群的简易检测实验八实验目的了解水质状况与细菌数量的联系。了解水中细菌总数的测定依据及应用，掌握水中细菌总数测定的方法及操作。了解饮水健康与水中大肠菌群的联系，掌握水中大肠菌群简易检测的方法及操作。实验原理水中细菌总数可以说明水被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。水中细菌种类繁多，生长条件各异。在一种培养条件下满足所有细菌生长是不可能的。通常采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，测得水中细菌总数的近似值。水中病原菌（如沙门氏菌、志贺氏菌等）多数源于病人和病畜的粪便，病原菌数量少且检测过程复杂。大肠菌群作为肠道内的正常菌，在粪便中数量大，且体外的存活时间与肠道致病菌相近，因此，一般采用测定大肠菌群数量来判断水源是否被粪便污染，并推测是否受肠道病原菌污染的可能。实验原理单击此处添加小标题大肠菌群并非细菌学分类命名，不代表某一种或某一属细菌。是卫生细菌检测领域用语，指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。单击此处添加小标题大肠菌群是一群好氧和兼性厌氧、无芽孢的革兰氏阴性杆菌，在乳糖培养基中经37℃培养24~48h，能产酸产气。主要包括埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和柠檬酸杆菌属，这类菌是温血动物肠道内的正常菌群，随粪便污染水源。单击此处添加小标题测定大肠菌群的方法有多管发酵法、滤膜法和各种简便检测盒。国家标准中采用的多管发酵法分为三步：初发酵试验、平板分离培养和复发酵试验。logo实验原理实验原理伊红美兰琼脂平板含有伊红与美兰染料，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境是，该两种种染料即可结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。滤膜法是将水样通过一定孔径的滤膜，然后将滤膜放在适宜的培养基上进行培养计数。实验原理实验原理我国1985年起实施的饮用水卫生标准（GB5749-85)规定：1毫升自来水中的细菌总数不得超过100个，每升自来水中肠道菌群不得超过3个。实验内容自来水中细菌总数的测定添加标题01单击此处添加小标题02单击此处添加小标题03单击此处添加小标题04采水样：开放水龙头使水流5min，以无菌三角瓶接取水样，迅速测定。用无菌吸管分别吸取1ml水样与两个无菌平皿中，分别倒入融化并冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即旋转混匀。另取一无菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，作为空白对照。凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h后计数，取两皿平均数作为1ml水样中的细菌总数。实验内容注意事项：自来水取样时避免取样中造成污染。自来水中含有余氯，可能对细菌有杀灭和抑制作用，会造成结果偏低或假阴性，可以加入少量硫代硫酸钠，与氯发生反应。操作过程要迅速，避免杂菌污染。倾注培养基时温度应冷却至45℃，避免烫死细菌。实验内容1采取水样：取学校“鉴湖”水面10~15cm，离岸边5cm的水样，立即测试。2稀释水样：取3支无菌试管，分别加9ml无菌水，加1ml水样到第一管内摇匀，再自第一管中取1ml至第二管中，如此稀释到第4管。3吸取第三、第四管稀释液各1ml至无菌平皿中，每一个稀释度重复两皿。4各倾注已经融化并冷却至45℃左右的伊红美兰琼脂培养基，立即摇匀。5凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h后计数。池水中大肠菌群的简易检测化学与生命科学学院化学与生命科学学院化学与生命科学学院