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淀粉酶活性测定实验报告

淀粉酶活性的测定

一、研究背景及目的

酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生

化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，

因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数，反映

的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力

单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的

量得到

淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作

用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶和β-淀粉酶是其

中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休眠的种

子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。

α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性

低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,关于α-淀粉酶活性的测定

方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的

方法常用的有凝胶扩散法、3,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。这

3种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉

酶活性应该分别是延

二、实验原理

萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β

-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则

发生钝化。本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）

下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。

酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦

芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水

杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基

团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。常用

单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。然后利用同样

的原理测得两种淀粉酶的总活性。实验中为了消除非酶促反应引起的麦

芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算

酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。

在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过

程中，四支测定管及空白管不要混淆。

三、材料、试剂与仪器

实验材料：

萌发的小麦种子（芽长1厘米左右）仪器：

722光栅分光光度计(编号990695)

DK-S24型电热恒温水浴锅(编号L-304056)离心机(TDL-40B)

容量瓶：50ml×1，100ml×1小台秤研钵

具塞刻度试管：15ml×6试管：8支移液器烧杯试剂：

①1%淀粉溶液（称取1克可溶性淀粉，加入80ml蒸馏水，加热熔

解，冷却后定容至100ml）；②pH5.6的柠檬缓冲液：

A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容至1L）B液（称取柠檬酸

钠29.41克，溶解后定容至1L）

取A液5.5ml、B液14.5ml混匀即为pH5.5柠檬酸缓冲液；

③3，5-二硝基水杨酸溶液（称取3，5-二硝基水杨酸1.00克，溶

于20ml1M氢氧化钠中，加入50ml蒸馏水，再加入30克酒石酸钠，待

溶解后，用蒸馏水稀释至100ml，盖紧瓶盖保存）；

④麦芽糖标准液（称取0.100克麦芽糖，溶于少量蒸馏水中，小

心移入100ml容量瓶中定容）；

⑤0.4MNaOH

四、实验步骤

1.酶液的制备

称取2克萌发的小麦种子与研钵中，加少量石英砂，研磨至匀浆，

转移到50ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，混匀后在室温下放置，每

隔数分钟振荡一次，提取15-20分钟，于3500转/分离心20分钟，取

上清液备用。2.α-淀粉酶活性的测定

①取4支管，注明2支为对照管，另2支为测定管

②于每管中各加酶提取液液1ml，在70℃恒温水浴中（水浴温度

的变化不应超过±0.5℃）准确加热15min，在此期间β-淀粉酶钝化，

取出后迅速在冰浴中彻底冷却。

③在试管中各加入1ml柠檬酸缓冲液

④向两支对照管中各加入4ml0.4MNaOH，以钝化酶的活性