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富硒花生中硒形态的测定高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱
法
1范围
本文件描述了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定富硒花生中硒形态的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算、精密度。
本文件适用于富硒花生中硒形态的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中5种硒形态用酶提取，经过反相液相色谱分离，电感耦合等离子体质谱仪测定，外标法定量。
5试剂与材料
5.1以下所用试剂，除特殊注明外，均为优级纯试剂；实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。
5.2七氟丁酸（C4HF7O2，98％）。
5.3磷酸二氢钾（KH2PO4），优级纯。
5.4甲醇（CH3OH）：色谱纯。
5.5链霉蛋白酶E（PronaseE，Solarbio）。
5.6微孔滤膜(PES)：47mm，0.22μm。
5.7流动相（30mmol/L磷酸二氢钾-0.15％七氟丁酸-2％甲醇）：称取8.1654g磷酸二氢钾（KH2PO4）(精确到0.0001g）于2L水中，搅拌至溶解，过0.22μm微孔滤膜（PES)，再量取磷酸二氢钾滤液1000
mL于1L洁净广口瓶中，加入1.5mL七氟丁酸和20mL甲醇溶液，超声30min，现配现用。
5.8标准品
5.8.15.8.25.8.35.8.45.8.5
硒代蛋氨酸（化学式：C5H11NO2Se，CAS号：2578-28-1），纯度≥98％。
L-硒代胱氨酸（化学式：C6H12N2O4Se2，CAS号：29621-88-3），纯度≥98％。
Se-甲基硒代-L-半胱氨酸(化学式：C4H9NO2Se，CAS号：26046-90-2)，纯度≥98％。硒酸钠（化学式：Na2O4Se，CAS号：13410-01-0），纯度≥98％。
亚硒酸钠（化学式：Na2SeO3，CAS号：10102-18-8），纯度≥98％。
5.9标准溶液
5.9.1硒代蛋氨酸标准储备液（100mg/L，按Se计）：称取2.43mg硒代蛋氨酸标准品（5.8.1），用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存，有效期3个月。
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5.9.2L-硒代胱氨酸标准储备液（100mg/L，按Se计）：称取4.15mgL-硒代胱氨酸标准品（5.8.2），用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存，有效期3个月。
5.9.3Se-甲基硒代-L-半胱氨酸标准储备液（100mg/L，按Se计）：称取2.26mgSe-甲基硒代-L-半胱氨酸标准品（5.8.3），用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存，有效期3个月。
5.9.4硒酸钠标准储备液（100mg/L，按Se计）：称取2.34mg硒酸钠标准品（5.8.4），用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存，有效期3个月。
5.9.5亚硒酸钠标准储备液（100mg/L，按Se计）：称取2.15mg亚硒酸钠标准品（5.8.5），用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存，有效期3个月。
5.9.6混合标准中间储备液(1mg/L)：分别准确吸取1.0mL硒代蛋氨酸标准储备液(100mg/L)、L-硒代胱氨酸标准储备液(100mg/L)、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸标准储备液(100mg/L)、硒酸钠标准储备液(100mg/L)、亚硒酸钠标准储备液(100mg/L)于100mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度。0℃~4℃避光保存，有效期3个月。
5.9.7混合标准储备液(硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸500μg/L；硒酸钠100μg/L；亚硒酸钠50μg/L）：分别准确吸取50.0mL硒代蛋氨酸标准储备液(1mg/L)、L-硒代胱氨酸标准储备液(1mg/L)、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸标准储备液(1mg/L)；10.0mL硒酸钠标准储备液(1mg/L)、5.0mL亚硒酸钠标准储备液(1mg/L)于100mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度。0℃~4℃避光保存，有效期2个月。
5.9.8混合标准使用液：取混合标准储备液（5.9
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