高三生物一轮复习课件第39讲 动物细胞工程及应用.pptx

第39讲动物细胞工程及应用

主要考点必备知识考点一动物细胞培养、干细胞培养及其应用考点二动物细胞融合技术和单克隆抗体考点三动物体细胞核移植技术与克隆动物

考点一动物细胞培养、干细胞培养及其应用

④培养对象：胚胎或幼龄动物的细胞幼龄个体的细胞分化程度低、分裂能力强，易培养。1、动物细胞培养①概念：②原理：③地位：动物细胞工程的基础从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。细胞分裂（增殖）【思考】：动物组织的选择：幼龄动物or老龄动物幼龄个体的细胞分化程度低、分裂能力强，易培养。⑤目的：获得细胞或者细胞产物动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件一、动物细胞培养

2.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件营养物质稳定的内环境糖类氨基酸无机盐维生素无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境一、动物细胞培养a.合成培养基：将细胞所需的营养物质按照种类和所需量严格配制而成的培养基。b.天然成分：血清人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，在使用合成培养基时，通常需要加入血清等一些天然成分。c.培养动物细胞一般使用液体培养基，也叫培养液

②无菌、无毒的环境无菌：①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理②在无菌环境下进行操作定期更换培养液，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害无毒：2.动物细胞培养的条件一、动物细胞培养③适宜的温度、pH和渗透压哺乳动物多以（36.5±0.5）℃为宜。温度：pH：多数细胞生存的适宜pH在7.2-7.4渗透压：动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数，维持细胞正常的形态和功能。O2:细胞代谢所必需的CO2：主要作用是维持培养液的pH④气体环境微生物培养中的作用不同（为自养型微生物提供碳源）在进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。

放入CO2培养箱中培养取动物组织传代培养制备细胞悬液原代培养转入培养液中放入CO2培养箱中培养用机械的方法，或用胰蛋白酶，胶原蛋白酶等处理的方法，将组织分散成单个细胞分瓶培养离心、收集细胞一、动物细胞培养

①选动物幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料的原因？这些个体的细胞生命力旺盛，细胞分化程度低、分裂能力强，易培养。②培养前为什么分散成单个细胞？a.分散的细胞不会限制彼此的生长与增殖；b.使细胞与培养液充分接触，一方面保证细胞所需氧气和营养的供应，另一方面保证细胞内代谢产物的及时排出。c.使得在细胞水平操作的其他得以实现。3.动物细胞培养的过程动物组织分散成单个细胞机械法：胰蛋白酶胶原蛋白酶处理一、动物细胞培养

③常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？说明细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以不能用胃蛋白酶。④实验过程中，胰蛋白酶处理时间过长，会出现什么结果？细胞膜的成分中含有蛋白质，而胰蛋白酶能够水解蛋白质，因此，胰蛋白酶会把细胞消化掉。因此，胰蛋白酶处理的时间不能太长。3.动物细胞培养的过程动物组织分散成单个细胞机械法：胰蛋白酶胶原蛋白酶处理一、动物细胞培养

3.动物细胞培养的过程动物组织块分散成单个细胞机械法胰蛋白酶胶原蛋白酶处理加培养液细胞悬液体外培养的动物细胞分为两类：一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖，称为悬浮生长。另一类则需要贴附于某些基质表面才能增殖，大多数细胞属于这种类型，称为贴壁生长。细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞需要贴附于某些基质表面才能增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁。用培养液将分散的细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。一、动物细胞培养

动物组织块分散成单个细胞机械法胰蛋白酶胶原蛋白酶处理加培养液细胞悬液原代培养传代培养放入培养瓶在适宜条件中在适宜条件中分瓶培养原代培养传代培养将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经过处理后的初次培养称为原代培养。将分瓶后的细胞培养称为传代培养。思考：为什么要进行分瓶培养？a.悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。b.贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素的影响外，还会发生接触抑制现象，即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。一、动物细胞培养

动物组织块分散成单个细胞机械法胰蛋白酶胶原蛋白酶处理加培养液细胞悬液原代培养传代培养放入培养瓶在适宜条件中在适宜条件中分瓶