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（1）酶联反应简介定义与原理ELISA又叫酶联反应，是一种免疫测定。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）酶标记的抗原或抗体（标记物）酶作用的底物（显示计）可设计出各种不同类型的检测方法酶联反应简介ELISA检测法必要试剂常用ELISA类型夹心法竞争法双抗体夹心法双抗原夹心法BH100检测原理为：双抗体夹心法25-OH-维生素D3检测：竞争法（1）酶联反应简介竞争法示意图竞争法：是利用待测抗原和酶标抗原与特异性抗体竞争结合，或待测抗体和酶标抗体与特异性抗原竞争结合而进行测定的一种方法维生素D3检测中竞争法应用原理25-OH-VD3试剂盒（酶联免疫法-竞争法），定量测定人体血清中的25羟基维生素D3，校准品、质控品、样品均被样品稀释液稀释，稀释后的样品和辣根标记的25羟基维生素D3抗原在包被了鼠单克隆抗体的微孔中温育1小时后洗版，然后利用TMB显色。终止反应后利用酶标仪读取吸光度值。颜色的强度和25-OH-VD3的浓度成反比。北京博晖公司研发的25-OH-VD3试剂盒原理概述（2）维生素D3检测中竞争法应用原理维生素D3检测试验准备与流程1BH公司VD3检测试剂盒自备材料与设备试剂准备维生素D3检测实验流程225-羟基维生素D3检测试剂盒包含内容注：试剂盒在2-8摄氏度，有效期一年BH公司VD3检测试剂盒（2）自备材料与设备5ml及以上的玻璃或聚丙烯微量离心管；注意：聚苯乙烯试管不适合，不要重复使用试管。高精度加样器（10ul、和200ul）以及对应枪头旋涡震荡器；自动洗板机（可选择）；酶标仪和数据分析装置；适用于具有450nm、630nm波长的所有全自动和半自动酶标仪恒温培养箱或恒温水浴箱。1定标血清和质控血清：定标血清和质控血清以冻干品的形式提供，使用前复溶于500ul蒸馏水中。盖紧瓶盖，室温下放置10-15min，期间颠倒摇晃几次，使其充分溶解，保存于2-8℃一周。2工作洗涤液：将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍后备用。3其他试剂直接使用-所有试剂使用之前应该平衡至室温并反复颠倒混匀。（3）试剂准备骨质疏松02骨痛（腰背酸疼痛）骨折身高缩短，骨骼畸形功能障碍（活动受限）01临床表现骨质疏松常见骨折椎体骨折桡骨远端骨折髋部骨折肱骨外科颈骨折38%19%19%（3）骨质疏松骨吸收抑制剂骨形成促进剂钙剂氟化物维生素D甲状旁腺素二膦酸盐维生素D降钙素合成类固醇雌激素选择性雌激素受体调节剂01骨质疏松02防治药物（4）维生素D中毒*发病机理：血浆中25（OH）D3水平过高，而不是1,25（OH）2D3水平升高造成。高维生素D血症病人血中25（OH）D浓度可比正常个体高15倍，但是他们的1,25（OH）2D3水平没有显著变化。短期多次大剂量维生素D治疗维生素D预防剂量过大误诊佝偻病错误治疗诊断：（4）维生素D中毒*01维生素D过量病史02早期血钙升高：高于3mmol/L03X线检查：软组织钙化21维生素D检测指南维生素D检测方法二、维生素D检测指南与方法维生素D检测指南维生素D缺乏诊断程序建议维生素D缺乏危险人群饮食补充维生素D维生素D治疗和预防策略内分泌学会2011年6月6日发表1《维生素D缺乏评估、治疗和预防的临床实践指南》2全文见《JournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism》与《内分泌学》3该指南针对不同年龄段、不同疾病背景的维生素D缺乏高危、低危人群，进一步明确了维生素D缺乏的有效评估、饮食补充和药物预防治疗的具体实施方法，指明了维生素D在非血钙受益上的不确定性，旨在达到维生素D缺乏防治的最优化内分泌学会2011年6月6日发表《维生素D缺乏评估、治疗和预防的临床实践指南》指南认为。维生素D缺乏的高危人群（例如西班牙裔、黑种人、妊娠妇女和肥胖个体等）应当接受维生素D水平筛查。外周血血清25-羟基维生素D水平低于20ng/ml者应被诊断为