人教版高中生物选择性必修3第3章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具课件.ppt

特别提醒????天然的质粒不能直接作为载体,基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上

进行过人工改造的。1.实验原理(1)DNA提取原理①DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精,可初步分离DNA和蛋白质。②DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,能溶于2mol/L的NaCl溶液。(2)DNA鉴定原理?知识点5DNA的粗提取与鉴定?2.方法步骤特别提醒????加入冷酒精后用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA

分子不能形成絮状沉淀。3.实验结果:溶有丝状物或沉淀物的试管变蓝,作空白对照的试管不变蓝。知识辨析1.一种限制性内切核酸酶能识别多种核苷酸序列,是否正确?不正确。限制性内切核酸酶具有专一性,通常情况下一种限制性内切核酸酶只能识别一

种特定的核苷酸序列,不同的限制性内切核酸酶识别的核苷酸序列不同。2.质粒可以作为基因的载体,通常采用抗生素合成基因作为标记基因,是否正确?不正确。通常采用抗生素抗性基因作为标记基因,而非抗生素合成基因。3.可以用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定吗?不可以。哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和众多细胞器,无法提取DNA。4.基因工程的原理是基因重组,这种变异是定向的吗?是。基因工程利用基因重组原理将外源基因导入受体细胞,对受体性状进行定向改造。提示提示提示提示5.DNA连接酶可以连接目的基因与载体的氢键,形成重组DNA,是否正确?不正确。DNA连接酶连接的是磷酸二酯键。6.用作载体的质粒DNA分子上至少含一个限制酶切割位点,是否正确?正确。用作载体的质粒DNA分子需至少含一个限制酶切割位点,便于目的基因插入其

中。7.在溶有DNA的NaCl溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色,是否正确?不正确。在沸水浴条件下,DNA遇二苯胺试剂呈蓝色。提示提示提示关键能力定点破定点1几种酶的比较?限制酶DNA连接酶解旋酶DNA聚合酶RNA聚合酶作用对象DNA分子DNA片段DNA分子脱氧核苷酸DNA分子、核糖核苷酸作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键氢键磷酸二酯键磷酸二酯键作用结果将DNA分子从内部剪切成片段,形成具有黏性末端或平末端的DNA片段将两个DNA

片段连接成

重组DNA分

子将双链DNA

分子局部解

旋为单链合成DNA链合成单链RNA分子特别提醒????限制酶和DNA连接酶的作用部位均为磷酸二酯键,但作用正好相反,前者“切

割”,后者“连接”。典例以下是几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是?(????????)A.以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的B.②片段是在识别序列为?的限制酶作用下形成的C.①和④两个片段在DNA聚合酶的作用下可形成重组DNA分子DD.限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键思路点拨????①④:限制酶的识别序列相同,切割产生的黏性末端相同,是同一种限制酶切割形

成的;②③:限制酶切割后形成的分别是黏性末端(与①④切割后形成的黏性末端不同)、平末

端。解析????图中DNA片段是由3种限制酶切割后产生的,A错误;②片段是在识别序列为

?的限制酶作用下形成的,B错误;①和④两个DNA片段可以连接形成重组DNA分子,但需要的是DNA连接酶,C错误。1.概念?知识点1基因工程(重组DNA技术)第1节重组DNA技术的基本工具2.理论基础?1.来源:主要是原核生物。知识点2限制性内切核酸酶(限制酶)特别提醒????(1)限制酶在原核生物中的主要作用:限制酶是原核生物的一种防御工具,用来切割侵入细胞

的外源DNA,以保证自身安全。(2)限制酶不切割原核细胞本身的DNA分子的原因:原核细胞的DNA分子中不具有限制酶的

识别序列,或对限制酶识别序列进行了修饰,从而使限制酶不能将其切开。2.功能:识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断

开。?特别提醒????限制酶特异性识别和切割的部位具有回文序列,即在切割部位,一条链正向读的

碱基顺序,与另一条链反向读的顺序完全一致。?上边链从5→3为AAGCTT,下边链从5→3也为AAGCTT。1.作用:将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。知识点3DNA连接酶E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体功能连接黏性末端或平末端区别E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要