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凝液凝固的概念血液由流动的溶胶状态变为不流动的凝胶状态的现象,称为血液凝固,这一过程所需要的时间称为凝血时间,正常为2~8min,可以帮助了解凝血因子是否缺乏或减少。凝血过程和止血过程(1)凝血过程包括凝血酶原激活物的形成(Xa、Ca2+、V、PF3)、凝血酶原变成凝血酶、纤维蛋白原变成纤维蛋白(2)止血过程包括破损血管收缩、血小板聚集形成松软止血栓、血液凝固形成牢固止血栓血管破损血液自行流出到自然停止的时间称为出血时间,正常为1~4min,可以帮助了解生理性止血过程是否正常。本实验是在预先暴漏血管的情况下直接从静脉取血,血液几乎没有和组织因子接触,同时在取血试管内加入抗凝剂如:1%乙二铵四乙酸钠1ml,柠檬酸钠(枸橼酸钠)或草酸钾,他们可与钙离子络合而除去血浆中的钙离子,从而起到抗凝的作用。肺组织浸液由准备室老师制备。我们用的富血小板是用兔的抗凝全血以每分钟1000转的低转速离心10分钟后取上层血浆制得的。少血小板血浆则是用4000转/分的转速高速离心30分钟后取上层血浆制得的,大部分的血小板在离心后沉降在试管底部,血浆中血小板含量很低。肺组织悬液,则是我们取家兔1g左右的肺组织,将其剪碎后,放入3ml生理盐水中浸泡24小时1000转低速离心后取上清液制得的,这种悬液离含有大量的组织因子,可以启动外源性凝血途径。当然如果用脑组织悬液效果会更好,因为脑组织的组织因子含量是最丰富的,但是脑组织悬液制备起来相当麻烦,所以我们用肺组织的悬液代替。取小烧杯两只,向两只烧杯中先分别注入1%乙二铵四乙酸钠1ml,再用注射器从家兔的颈静脉或者颈动脉各抽取5ml全血分别置入两烧杯中。然后分别向烧杯中按照4d/ml的比例滴入复钙溶液,这个溶液实际就是将2.8g无水氯化钙溶于1000ml蒸馏水中,然后过滤制得的,我们在实验前就已经准备好了,大家直接用滴管在试剂瓶中取。[注意事项]1.对比实验复钙紧接着进行(同时加入M/40CaCL2,,摇匀),以减少计时的误差。
2.判断凝血的标准要力求一致。一般以倾斜试管达45℃时,15秒倾斜一次,试管内血液不见流动为准。
3.每支试管口径大小及采血量要相对一致,不可相差太大。棉花不要太紧,要松软。用液体石蜡将试管内表面全部石蕊后,将液体石蜡全部倒掉。丝氨酸蛋白酶抑制物:最重要的是抗凝血酶3,其由肝脏和血管内皮细胞产生,与激活的2、9、10、11、12凝血因子等的分子活性中心的丝氨酸残基结合而抑制其活性。肝素与抗凝血酶3结合后,抗凝血酶3的活性增强2000倍。7.正常情况下,血流在血管内不凝固的原因:
??(1)血流速度快,(2)血管内膜光滑,(3)血浆中存在天然抗凝物质和纤维蛋白溶解系统二、血小板的生理作用
?????1.维护血管壁完整性的功能。
?????2.参与生理止血功能。
?????(1)血小板粘附、聚集形成松软止血栓,防止出血。
?????(2)血小板分泌ADP、5-羟色胺、TXA2等活性物质,ADP使血小板聚集变为不可逆,5-羟色胺等使小动脉收缩,有助于止血。
?????(3)促进血液凝固,形成牢固止血栓。血小板在凝血中的作用(1)活化的血小板为凝血因子的激活提供磷脂表面。(2)血小板激活后释放的活性物质(5-HT和TXA2)可促进血管收缩,也促其自身聚集。(3)血小板还释放纤维蛋白原(?)及钙离子等凝血因子,加速凝血过程。(4)吸附凝血因子(?、Ⅴ、Ⅸ等),使局部凝血因子浓度升高,利于血液凝固。(5)血小板的收缩,可引起血凝块收缩,挤出血清,使血凝块变得更坚实。血液凝固及其影响因素药理教研室:张建武Email:实验室不可大声喧哗,各组间可互相观摩。实验结束,留下一组同学打扫卫生,老师检查后方可离开。组长提前10分钟持有效证件到实验准备室借实验器材。穿好工作服,不迟到早退。实验完毕,动物统一回收,集中销毁。部分实验要求写出实验报告12345实验室规则学习测定血液凝固时间的方法。01了解钙离子和纤维蛋白在血液凝固中的作用。02了解血液凝固的基本过程,以血液凝固的时间为指标,观察不同因素对血液凝固速度的影响。03实验目的血液凝固的概念:由流动的胶体状态变为不能流动的冻胶凝块的过程。正常为2-8min血液凝固的本质:由多种凝血因子参与的酶促反应,使可溶性的纤维蛋白原变成不溶的纤维蛋白,最终网罗血细胞而成血凝块。实验原理内源性凝血外源性凝血ⅫⅫaⅨⅪaⅪⅩⅩaⅤaCa2+PL组织损伤ⅡⅩⅡaⅠ胶原、玻璃、异物ⅢⅦCa2+PLⅨaⅧaCa2+PL
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