2.2.2 动物细胞融细胞与单克隆抗体-高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptx

细胞膜具有一定的流动性。一、动物细胞融合技术2.原理：4.诱导融合常用的方法：1.概念：3.结果：⑴灭活？⑵灭活病毒诱导细胞融合的原理？突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。6.意义：7.应用：5.过程：细胞膜融合→细胞质融合→细胞核融合（实质）

植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用纤维素酶和果胶酶去细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法杂种细胞再生出新的细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制备单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较

抗原不纯抗体不纯缺陷：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。不能无限增殖产生大量抗体动物体内抗原刺激浆细胞抗体筛选单一B细胞增殖分化二、单克隆抗体及其应用1.传统抗体制备方法及缺陷

科学家发现：体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上，每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体。单克隆抗体如何获得大量、单一的抗体？遗憾：体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖。如何解决？二、单克隆抗体及其应用抗体一个B淋巴细胞细胞群克隆单克隆抗体：由单一B淋巴细胞克隆产生的特异性抗体。

二、单克隆抗体及其应用单克隆抗体的制备思路一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体既能迅速大量增殖，又能产生抗体。癌细胞动物细胞融合⑴我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?⑵怎样使B细胞同时具备产生抗体和无限增殖能力？思考：

注射特定的抗原从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞培养多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合多种杂交细胞从小鼠的脾脏中获取2.单克隆抗体的制备过程二、单克隆抗体及其应用

置于选择性培养基上培养213第一次筛选多种杂交瘤细胞融合的细胞骨髓瘤细胞自身融合B细胞自身融合杂交细胞132未融合的B淋巴细胞未融合的骨髓瘤细胞二、单克隆抗体及其应用

特定的选择性培养基（HAT培养基）的筛选原理①细胞合成DNA有两条途径，正常细胞内两种途径都有，若全合成途径被阻断，可以通过补救合成途径合成DNA；②骨髓瘤细胞不能合成转化酶和激酶，因此只能进行全合成途径；③全合成途径能被氨基喋呤（A）阻断；④次黄嘌呤（H）、胸腺嘧啶（T）是补救合成途径的原料；⑤无增殖能力的细胞在培养基中存活仅5～7天。将诱导融合后的细胞接种于HAT培养基后两周，则细胞生存状况及原因为：①B细胞和B-B细胞死亡，能进行补救合成途径，但是无增殖能力；②骨髓瘤细胞和瘤-瘤细胞死亡，两种途径均无法进行，无法合成DNA并增殖；③杂交瘤细胞存活，能进行补救合成途径，能合成DNA并大量增殖。第一次筛选:获得杂交瘤细胞二、单克隆抗体及其应用

克隆化培养抗体检测第二次筛选(抗原-抗体杂交技术)多种杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞阳性细胞二、单克隆抗体及其应用

阳性孔将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔（抗体检测）多孔细胞培养板抗体检测板分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞第二次筛选:获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法

克隆化培养和抗体检测★每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞有限稀释法侧面模拟图克隆化培养一段时间取上清液进行抗体检测第二次筛选:获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞

注射到小鼠体内体外培养分离、提纯单克隆抗体体内或体外培养能分泌所需抗体的杂交瘤细胞二、单克隆抗体及其应用

骨髓瘤细胞培养杂交瘤细胞单一抗体阳性细胞单克隆抗体细胞融合B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合筛选克隆抗体检测，筛选脾脏中获取单克隆抗体

第一次筛选第二次筛选原因方法结果诱导融合后得到的细胞中，除杂交瘤细胞之外，还有未融合的亲本细胞，也有融合的具有同种核的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经第一次筛选之后获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞用特定的选择培养基进行筛选用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）获得杂交瘤细胞获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞二、单克隆抗体及其应用

（1）该过程中应用到的技术（2）原理（3）注射特定抗原的目的？（4）第一次筛选目的、筛选方法、筛选原理？（5）杂交瘤细胞的特点？（6）第二次筛选的目的、筛选