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ING4和FP248基因检测在白血病和消化道肿瘤中的临床意义

学生李继刚导师许文荣江苏大学基础医学与医学技术学院2008年06月06日一研究背景1.ING4基因(1)ING4基因的生物学特性及功能p13.31ING4，8个外显子诱导P21表达上调ING4的变异与肿瘤发生的关系神经母细胞瘤细胞株肺癌细胞株乳腺癌细胞株结直肠癌细胞株ING4变异白血病？健康人心、脑、肝、肺、肾组织01ING4-V1:30%－35%02ING4-V2:42%－50%03成人及胎儿心、脑、肝、肺、肾04肿瘤组织05白血病？？？06消化道肿瘤？？？07本研究检测白血病患者骨髓08中主要剪接方式091ING4在多种肿瘤组织中表达下调3神经胶质瘤2ING44头颈部鳞状细胞癌5肺癌6消化道肿瘤白血病018q24.3，FP248，3个外显子802与肝癌有关0304FP248蛋白质，208aa原癌基因FP248其他肿瘤？？？05二研究内容和研究意义1.研究目的建立检测ING4和FP248基因的realtimeRT-PCR和nestedRT-PCR方法，并分析ING4和FP248基因对白血病和消化道肿瘤的诊断意义。3.研究内容建立采用RT-PCR和real-timeRT-PCR检测ING4和FP248mRNA表达的方法研究ING4和FP248在多种肿瘤细胞株中的表达水平ING4和FP248基因在白血病中的临床意义ING4和FP248基因在消化道肿瘤中的临床意义标，也为这些疾病的基因治疗提供了两个靶基因。为白血病和消化道肿瘤的诊断和预后提供新的更为便捷的方法和指研究意义1.成功建立了采用real-timeRT-PCR检测ING4和FP248基因表达的方法三方法建立注:A：ING4标准品扩增曲线；B：ING4标准品扩增产物融解曲线，C：ING4标准曲线.图1.ING4标准品注：A：FP248标准品扩增曲线；B：FP248标准品扩增产物融解曲线C：FP248标准曲线.图2.FP248标准品注：A：GAPDH标准品扩增产物融解曲线；B：GAPDH标准品扩增曲线；C：GAPDH标准曲线。图3.GAPDH标准品成功建立了采用Western印迹技术检测ING4蛋白质表达的方法；成功建立了采用免疫组织化学技术检测组织中ING4蛋白质表达的方法。表1.real-timeRT-PCR关键参数1实验设计2肿瘤细胞株中ING4和FP248基因表达检测3肿瘤细胞6检测FP248mRNA5检测ING4mRNA4抽提总RNA注：A.细胞株中ING4基因及部分标准品扩增曲线标准品浓度：102copies/μl和103copies/μl及108copies/μl.2.研究结果AB.real-timeRT-PCR测定结果1：SW480；2：SGC；3：U937；4：hBM-MSC.BC.RT-PCR测定结果1：SW480；2：SGC；3：U937；4：hBM-MSC.C图4.FP248在肿瘤细胞中的表达注：A.real-timeRT-PCR扩增曲线。B.real-timeRT-PCR检测FP248mRNA实验重复3次。1：U937；2：SGC；3：hBM-MSC；4：PLA801-95D；5：A549。C.RT-PCR检测FP248mRNAb：blank；1：U937；2：SGC；3：hBM-MSC；4：PLA801-95D；5：A549；6：PC3；7：SW480；M：DNAmarker(100bpsDNALadder)。图5.FP248在肿瘤细胞中的表达1A2B3C4ING4和FP248基因检测在白血

病中的表达及临床意义表.骨髓标本和标本资料注：以上标本由江苏大学附属医院提供骨髓和外周血01分离单个核细胞02抽提总RNA03逆转录并检测ING4基因