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脾内免疫优点：时间短，使用抗原量少。可溶性抗原：2~10?g疫的脾内免疫。缺点：效果差于常规免疫，尤其无基础免细胞抗原：1?105010203040506免疫方法脾内免疫方法：BALB/C小鼠乙醚麻醉，右卧位，消毒，无菌操作剪开皮肤，透过腹膜，用4号针头注射器注入脾脏，尽量刺深，勿刺透，纵轴方向，边退边注射或多点注射。注意事项：抗原体积?0.2ml，脾内逐步注射后，针头拔出口时要停留片刻，缝合切口或用医用黏合剂涂抹切口。免疫方法.弱免疫原免疫方案；天：基础免疫天：基础免疫天：基础免疫天：基础免疫天：基础免疫6个月内，至鼠血清测出抗体产生。静脉或脾内追加免疫后72~96h细胞融合。免疫方法分离小鼠脾细胞，置10%~20%FCS01RPMI1640培基，加适量滋养细胞与抗原02（可溶性抗原0.5~5?g/ml；细胞性抗原035~106/ml），37℃，5%CO2培养3天，04再分离淋巴细胞与骨髓瘤细胞，融合。05体外免疫：免疫方法机制：不明，通常认为这类细胞释放滋养细胞制备：01条件。小鼠腹腔巨噬细胞制备滋养细胞正常无感染BALB/C小鼠，处死。75%乙醇浸泡5~10min，一种或几种生长因子，提供必要生长02单克隆抗体制备01撕开腹部皮肤，充分暴露腹腔，提起02腹膜，剪开，吸管注入5ml无血清培基，03小心提动或轻揉腹膜，吸出培基。04无血清培基洗2次，细胞浓度2×105/ml,050.1ml/孔/96孔，相当于2×104。通06常获2×106~5×106只。单克隆抗体制备复苏，20%FCSRPMI-1640培基为好。培养、传代，取对数生长期细胞（1×105~5×105/ml），按1：5~1：10骨髓瘤细胞准备：Sp2/0,NS-1等01RPMI-1640培基洗3次（1000r/min×5min)稀释传代，2、3天扩大培养，选生长状态、形态好对数生长期细胞融合用。02单克隆抗体制备骨髓瘤细胞的细胞活数应在〉95%，无各种污染，骨髓瘤细胞质量保证、生长密度合适。注意事项：单克隆抗体制备肿瘤细胞培养技术

解放军总医院免疫室

林星石研究员肿瘤类型：间充质上皮神经外胚层造血源性（1955-1958-1963-1965）Invitro:原代传代建系（1967-1970）配基成分：纯血清含血清无血清生物学特性：细胞亚细胞酶和分子Histroy肿瘤细胞invitro的特点细胞保持永生性：自我复制形态学：大小不一?逐渐一致增殖力更强：DNA合成期、分裂期达50%突变性：不同于正常细胞，失去稳定的控制高分化变低分化表面性状：负电荷数量正常，贴壁性?，抗原性可变异接触抑制减弱或消失：悬浮生长特征：成瘤性：移植到动物体内可成瘤RPMI1640：最常用，+10~20%FCS，上皮性或悬浮性（+0.03%谷氨酰胺）DMEM：常用F12：适用于上皮性癌，如肝癌，L-15：注意：+2g/LNaHco3或+20mmol/LHEPES?pH7.2RPMI1640+F12或L-15（1:1）：适用肉瘤肿瘤细胞invitro培基常用的促细胞生长因子及使用的终浓度添加剂终浓度添加剂终浓度BSA10-5mol/mlEGF5ng/mltransferrin5-10?g/mlFGF5ng/mlinsulin5pg/mlNGF5ng/ml氢化可的松10-5mol/ml培养液特殊添加剂与常规细胞培养技术相同一个细胞群体，存在多种亚群，复杂性建株细胞较正常细胞易于培养肿瘤细胞的培养多种基因的协同作用调控因子：基因：Cdc2、cyclin蛋白磷酸化蛋白激酶的调控