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动物源奇异变形杆菌微生物分子分型脉冲场凝胶电泳(PFGE)法
1范围
本文件规定了实验室动物源奇异变形杆菌分子分型PFGE检测的技术要求。
本文件适用于实验室动物源奇异变形杆菌的分子分型检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括
所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB19489实验室生物安全通用要求
SN/T2552.8-2010乳及乳制品卫生微生物学检验方法第8部分：普通变形杆菌和奇异变
形杆菌检验
3术语和定义、缩略语
3.1术语和定义
以下术语和定义适用于本文件。
3.1.1OD值
光密度（OpticalDensity，OD），表示被检测物吸收的光密度，也可以称为吸光度。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量。特定波长下，同一种被检测物
的浓度与被吸收的能量成定量关系。
3.1.2SeakemGoldAgarose（SKG）
一种高凝胶强度，适用于脉冲场凝胶电泳法快速分辨50Kb-10MbDNA和常规电泳方法分辨1-50KbDNA与PCR产物。因其低电渗（EEO）特性，SeakemGoldAgarose中的DNA电泳迁移速度显著高于常规琼脂糖凝胶。PFGE电泳时间依使用缓冲液和琼脂糖浓度的不同
可减少至原电泳时间的50%。
3.2缩略语
以下缩略语适用于本文件。
BHI：脑心浸液琼脂（BrainHeartInfusionAgar）
Tris-HCl：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）
EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）
SDS：十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate）
TBE：Tris-硼酸-EDTA缓冲液
EB：溴化乙锭（Ethidiumbromide）
TE：Tris-EDTA缓冲液
CLB：细胞裂解液（CellSuspensionBuffer）
CSB：细胞悬浊液（CellLysisBuffer）
4原理
脉冲场凝胶电泳（PulsedFieldGelElectrophoresis，PFGE）通过选取合适的限制性内切酶对细菌基因组进行酶切，经脉冲场凝胶电泳分离DNA片段，通过比较染色体限制性内切酶图谱，以确定各菌株之间的亲缘关系，从而对细菌进行分型。PFGE具有结果稳定、分辨率高和重复性好等优点，不仅可利用限制性内切酶对细菌全基因组数据进行鉴别与分型，还可直接或间接反映菌株基因组的变异情况，广泛应用于研究细菌的分子流行病学特点，被称
为细菌分子分型研究的“金标准”。
5试剂与耗材
5.1BHI琼脂（按照附录A.1配制）
5.21mol/LTris-HCl，pH8.0（按照附录A.2配制）
5.310mol/LNaOH（按照附录A.3配制）
5.40.5mol/LEDTA，pH8.0（按照附录A.4配制）
5.510%SDS（按照附录A.5配制）
5.610×TBE，pH8.3（按照附录A.6配制）
5.7EB染色液（按照附录A.7配制）
5.820mg/mL蛋白K储存液（按照附录A.8配制）
5.9TE，pH8.0（按照附录A.9配制）
5.10CLB，pH8.0（按照附录A.10配制）
5.11CSB，pH8.0（按照附录A.11配制）
5.12SeaKemGoldagarose
5.13Falcon2054管（12mm×75mm）
5.14接种环（10μL）
5.15枪头（10μL、200μL和1000μL）
5.161.5mL离心管
5.1750mLscrew-cap管
5.18Greenscreened-cap（1703711）
5.19一次性模具（1.5mm×10mm×5mm）
5.20手术刀片
5.21标准胶槽（14×13cm框和平板）
5.2215孔梳子（21cm×1.5mm）
5.23无菌玻璃瓶（50mL-2000mL）
6仪器与设备
6.1恒温培养箱
6.2振荡培养箱
6.3超净工作台
6.4细菌浊度仪
6.5水浴摇床
6.6水浴锅
6.7pH酸度计：0.01级
6.8高压灭菌锅
6
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