3.2基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

我国是棉花的生产和消费大国。棉花在种植过程中，常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最为常见。;转基因抗虫棉;当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。;苏云金杆菌;;实例：Bt抗虫蛋白基因（Bt基因）的筛选过程;三、获取目的基因的方法;基因组文库与部分基因文库的关系;利用PCR获取和扩增目的基因（超级厉害，超级好用）;利用PCR获取和扩增目的基因;【重温】DNA复制的过程，回忆DNA体内复制所需的条件;C;C;C;C;C;4.复制所需的基本条件:;;引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。

（引物1和引物2的序列相同吗？？引物长度？DNA还是RNA序列？？）;5’-TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC-3’

3’-AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG-5’;以下这两组引物的序列选择合理吗？原因？;体外合成DNA需要这些条件吗？提供条件的方式相同吗？还需要其他条件吗？;5.PCR的过程;①变性;第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物。;PCR中的数量关系（初始DNA数量为1个）;（1）图1所示利用PCR技术扩增目的基因，在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。;PCR扩增过程中产生等长的目的基因片段的分析;循环

次数;要保证扩增出来的目的基因能与载体相连接，还要对引物进行什么操作？;【三点提醒】;7.PCR产物的鉴定;6.比较PCR扩增技术和体内DNA复制的异同;（1）PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应（）

（2）PCR扩增技术中，需用解旋酶使双链DNA解聚（）

（3）PCR过程使用的DNA聚合酶的特点是耐高温（）

（4）PCR技术中，DNA模板链上碱基G和C的比例越高，DNA变性解链的温度就越高（）;实时荧光RT-PCR可用于RNA病毒的核酸检测，其原理是∶在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT-PCR进行核酸检测的相关过程???图所示。下列说法错误的是（）

A．做RT-PCR之前，需要先根据cDNA的核苷酸序列合成引物和探针

B．RNA不能作为PCR扩增的模板，故需要将样本中的RNA反转录为DNA后再进行扩增

C．若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒

D．病毒的检测还可以检测病毒的物质或病毒引发产生的抗体，其原理都是抗原-抗体杂交;通过引物设计运用PCR技术可以实现目的基因的定点突变.图1为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5端分别设计增加限制性内切酶a和限制性内切酶b的识别位点.有关叙述正确的是（）;②设计引物的依据是：

_______________________

③两种引物都结合在DNA模板链的_____端

脱氧核苷酸连接在引物的_____端进行延伸，子链的延伸方向_____

;Bt基因;二、基因表达载体的构建;;;启动子;3．基因表达载体的构建过程;①首先用一定的切割载体（质粒），使它出现一个切口。;【问题探究6】请结合下图，回答问题：;（3）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点是什么？;;【核心归纳】图解限制酶的选择原则;（1）基因工程操作程序的核心步骤是目的基因的获取（）

（2）基因表达载体中有的含有启动子和终止密码子（）

（3）标记基因不一定是抗生素抗性基因（）

（4）当诱导物存在时，诱导型启动子可以激活或抑制目的基因

的表达（）;【例5】用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液(Marker)，10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是();【例6】下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图（其中ampr为抗氨苄青霉素基因）。下列叙述错误的是（）;1．下列有关体内DNA复制与PCR技术比较的叙述，错误的是()