《化妆品紧致功效体外测试方法 斑马鱼I型胶原蛋白和弹性蛋白基因测试》（征求意见稿）.docx

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ICS71.100.70CCSY42中国香料香精化妆品工业协会??发布2024-X-XX实施2024-X

ICS71.100.70

CCSY42

中国香料香精化妆品工业协会??发布

2024-X-XX实施

2024-X-XX发布

化妆品紧致功效体外测试方法

斑马鱼Ⅰ型胶原蛋白和弹性蛋白基因测试

InVitroEvaluationofElasticityEfficacyofCosmetics

-ZebrafishTypeICollagenandElastinGeneExpressionTestMethod

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

T/CAFFCIXX—2024

团体标准

T/CAFFCIXX—2024

T/CAFFCIXX—2024

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国香料香精化妆品工业协会提出并归口。

本文件起草单位：水中银（国际）生物科技有限公司、广州质量监督检测研究院、广东省实验动物监测所、杭州环特生物科技有限公司、华熙生物科技股份有限公司、诺斯贝尔化妆品股份有限公司、云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司、美出莱（杭州）化妆品有限责任公司、广州銮滢化妆品有限公司、无限极（中国）有限公司、广州雅纯化妆品制造有限公司、诺德溯源（广州）生物科技有限公司、福建片仔癀化妆品有限公司、北京宝洁技术有限公司、广州阳菲生物科技有限公司、广东贝豪生物科技有限公司、广东康容实业有限公司。

本文件主要起草人：

T/CAFFCI

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化妆品紧致功效体外测试方法

斑马鱼Ⅰ型胶原蛋白和弹性蛋白基因测试

范围

本文件描述了化妆品紧致功效的体外测试方法-斑马鱼Ⅰ型胶原蛋白和弹性蛋白基因表达测试方法。

本文件适用于通过促进Ⅰ型胶原蛋白和/或弹性蛋白再生而达到紧致效果的化妆品功效评价。化妆品原料的紧致功效测试可参考本文件。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和测试方法

GB/T39649实验动物实验鱼质量控制

DB32/T3979实验用斑马鱼饲育技术条件

T/OTOP1038斑马鱼实验室建设技术规范

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

基本原理

紧致是指有助于保持皮肤的紧实度、弹性。在日常生活中，日照、化合物刺激等多种外部原因加上人体自身的内部衰老，导致皮肤中胶原蛋白和弹性蛋白等皮肤基质损伤流失，从而失去弹性。胶原蛋白是人体细胞外基质中含量最高的蛋白，其中I型胶原蛋白是皮肤中最丰富的蛋白质，约占成人皮肤胶原蛋白总量的85%，其含量决定了皮肤的密实度。弹性蛋白是人体皮肤中一种让体内许多组织在拉伸和收缩后维持原有形状，让皮肤在被挤压后恢复到本来形状的蛋白质，对维持皮肤弹性起着重要作用。

斑马鱼皮肤和人体皮肤相比，除表皮为分化了的表皮细胞和黏液层而非角质层外，其余结构和人体皮肤高度相似。斑马鱼的I型胶原蛋白分布与人体相同，I型胶原蛋白和弹性蛋白都显示出与人类的高度保守性，两者的内源基因表达水平都在受精后4天内一直升高，然后下降,6天至8天时相对平稳。

本方法应用6天大的斑马鱼进行暴露实验，通过测试受试物是否促进斑马鱼I型胶原蛋白基因（col1a1a，col1a1b和col1a2）和/或弹性蛋白基因（elna）的表达，评价受试物促进I型胶原蛋白和/或弹性蛋白再生以增加皮肤紧实度和/或弹性的紧致功效。

仪器和设备

5.1分析天平：精度0.1mg。

5.224孔板：玻璃或聚苯乙烯材质。

5.3生化培养箱：精度±1℃。

5.4微量匀质机。

5.5高速冷冻离心机：转速17,000×g。

5.6超微量紫外分光光度计：波长范围包含230nm，260nm和280nm。

5.7PCR扩增仪。

5.8微孔板离心机。

5.9qPCR仪。

5.10其他常规仪器和设备：旋涡混合仪、移液器、低