肿瘤分子诊断学.pptVIP

0103050204RFLPVNTR小卫星DNA多态微卫星DNA多态单核苷酸多态DNA多态性variablenumberoftandemrepeat,VNTR人类基因组中含有一些重复序列家族，有些序列分散在基因组中，有些是以一系列短的重复序列排列组成高变区，其串联重复序列拷贝数可相差很多，约占单倍体DNA的10%，基本上位于非编码区。重复单位以6~70bp为多，重复次数约6~100次，称为数量可变的串联重复序列。数量可变的串联重复序列RFLP限制性片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism）当DNA序列的差异发生在限制性内切酶识别位点或当DNA片段的插入、缺失或重复可使基因组DNA经限制性内切酶水解后发生片段长度改变。因这些特异基因片段是限制性内切酶产生的，在不同个体间可出现不同长度的限制性片段类型，故称为限制性片段长度多态性。概念RFLPA小卫星DNAB细胞内基因组含有大量的碱基重复序列，一般将6~70bp的串联重复称为小卫星DNA。01微卫星DNA02将1~4bp的串联重复序列称为微卫星DNA，又称简单重复序列（simplerepeatsequence,SRS)。微卫星不稳定性microsateliteinstability,MI是指简单重复序列的增加或丢失，特别是在DNA错配修复系统（DNAmismatchsystem,DNAMMR)缺损的肿瘤基因组中常显示大量的MI。0102微卫星不稳定性与肿瘤MI与癌基因或抑癌基因的变化之间无明显关系，即癌基因或抑癌基因的突变并不增加微卫星的不稳定性。MI与肿瘤的发展有关，MI仅在肿瘤细胞中发现，从未在正常组织中检测到。在原发与转移性肿瘤中，MI均匀分布于整个肿瘤。在晚期胃癌的MI频率显著高于早期胃癌。微卫星不稳定性端粒：是位于细胞染色体末端的一种由2~20kb串联的短片段重复1序列（TTAGGG)n及一些结合蛋白组成的特殊结构，在染色2体定位、复制、保护和控制细胞生长寿命等方面具有重要作3用，并与细胞凋亡、细胞转化和永生化密切相关。4端粒酶：为由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白复合物（RNP)，5含有端粒重复序列的模板，即以自身RNA组分为模板，复6制合成端粒序列。7目前有关端粒酶活性表达的研究已覆盖了人类大部分的实体瘤。8端粒酶与肿瘤端粒酶与肿瘤的关系及检测基因变异及其检测一、点突变指基因在特定位置发生一个核苷酸的改变，使相应蛋白质的一个氨基酸改变，继而改变了蛋白质的空间构型和生物学功能。1等位基因特异性寡核苷酸分析法（allele-specificoligonucleotide,ASO）；2等位基因特异性扩增法（allele-specificamplification,ASA）；3限制性片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphisim,RFLP）分析；4DNA测序；5基因芯片已知点突变的检测点突变的检测010203040506单链构象多态性（single-strandconformationalpolymorphisim,SSCP）分析；杂合双链分析法（HA)；变性梯度凝胶电泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis,DGGE）；突变体富集PCR法；DNA测序；基因芯片未知点突变的检测点突变的检测二、基因扩增是细胞原癌基因在细胞基因组内拷贝数的增加及其表达水平的增高。基因扩增的检测

—核酸分子杂交DNA的检测原位杂交(insituhybridization)和荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization)DNA杂交(Southernblot)原位PCR(insituPCR)DNA-DNA杂交DNA-RNA杂交RNA-RNA杂交基因探针和靶核苷酸不同否能被直接检测直接法间接法探针的标记物是原位杂交分类01特异性强、灵敏度高，具有组织细胞化学染色的可见性02既可用新鲜组织，又可用石蜡包埋组织作回顾性研究03所需样本量少，可用活组织细针穿刺和细胞涂片04应用范围广，可对特定的基因（如癌基因、病毒基因）DNA、mRNA的表达进行定位、定性、定量、组织细胞分布和杂交电镜的亚细胞定位研究原位分子杂交技术优点基因扩增的检测

—核酸分子杂交mRNA的检测：基因芯片等。Northernbl