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六、抗体的制备多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体多克隆抗体(polyclonalantibody,pAb)一种抗原表位能激活一种B细胞克隆。用一种包含多种表位的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,称为多克隆抗体。实际意义:(1)预防、治疗感染性疾病如:破伤风抗毒素血清?抗破伤风,胎盘球蛋白?抗病
毒感染等,副作用:?超敏反应(2)临床诊断如:肥达氏反应---伤寒、副伤寒。缺点:特异性差。单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)由单一杂交瘤细胞产生,针对单一抗原表位的特异性抗体,称为单克隆抗体。mAb结构高度均一,具有纯度高、特异性强等特点,少或无交叉反应性。实际意义:(1)抗原的纯化和结构分析;(2)细胞发生、分化及功能的阐明;(3)临床疾病的诊断和治疗。如:免疫分子检测;免疫靶向药物治疗恶性肿瘤---McAb抗癌药物(毒素或放射核素偶联)。多克隆和单克隆抗体的制备基因工程抗体(geneticengineeringantibody)在DNA水平对抗体基因进行切割、拼接或修饰,导入受体细胞表达的抗体。人鼠嵌合抗体、人源化抗体和人抗体技术及制备技术的成熟,基本上可以克服鼠源性抗体用于人体产生抗抗体的问题;在人体内的半衰期从鼠源性抗体小于20小时到人源化抗体和人抗体的半衰期为数天、甚至21天之久。免疫分子本部分提要免疫球蛋白或抗体的基本结构是由2条相同的重链和相同的轻链借链间二硫键连接构成。每条肽链都具有可变区和恒定区,并且以典型的折叠成球状的功能区呈现。可变区特别是其中的超变区与识别抗原、特异性结合抗原的中和效应相关;恒定区进一步介导其它免疫细胞或免疫分子的各种生物学效应。免疫球蛋白分子可被木瓜蛋白酶解离为2个Fab片段和1个Fc片段,被胃蛋白酶解离为F(ab’)2片段和pFc片段。免疫球蛋白具有特异性、多样性和免疫原性。五大类免疫球蛋白具有不同的理化特性和生物学功能。当今医学发展中的单克隆抗体和基因工程抗体研究正在迅速展开。预习题什么是补体?补体是怎样激活的,补体激活的三条途径有和异同?补体的生物学功能有哪些?细胞因子有何特点?细胞因子的共同特点和生物学功能有哪些?铰链区(hingeregion)位于CH1和CH2之间含有链间二硫键IgE和IgM无铰链区铰链区富含脯氨酸,有弹性,使Ig伸展自如,同时使铰链区易被酶接近而消化免疫分子1.J链(joiningchain)J链是浆细胞分泌的一条多肽链,分子量为15kD,富有半胱氨酸。参与IgA二聚体和IgM五聚体的连接。2.分泌片(secretorypiece,SP)分泌片又称分泌成分(secretorycomponent,SC)是分泌型IgA分子上的一个辅助成分,由黏膜上皮细胞合成和分泌的一种含糖的肽链,结合于IgA二聚体上,具有保护分泌型IgA免遭水解酶降解的作用,并介导IgA的转运。J链分泌片(二)抗体的辅助成分(三)抗体分子的水解片段木瓜蛋白酶:IgG2Fab+Fc胃蛋白酶:IgG(Fab’)2+pFc’抗体分子的水解片段Fab段(fragment
antigenbinding)结构:L+1/2H
(VH+CH1)单价,结合抗原后
不能形成凝集或
沉淀反应(Fab’)2双价抗体活性能形成凝集或沉
淀反应生物制品应用Fc段(fragment
crystallizable)结构:CH2+CH3赋予抗体多种生物
学功能(一)特异性(二)多样性(三)免疫原性三、抗体的免疫学特性(一)特异性:抗体与抗原结合的特异性同一B细胞分泌的抗体与其膜表面的抗原受体(BCR)具有相同的特异性。抗体分子只能与诱发其产生的抗原,而不能与其他抗原结合的特性,如抗甲肝病毒抗体只能与甲肝病毒抗原结合而不能与乙肝病毒抗原结合。这种特异性是由抗体超变区氨基酸组成及空间构型决定的。抗体与抗原结合的高度特异性使抗体成为临床诊断中的重要工具。AbAg(
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