植物多倍体诱发和鉴定.ppt

植物多倍体诱发和鉴定实验目的1.了解人工诱导多倍体的原理2.学习用秋水仙碱诱发多倍体植物的方法二、实验原理秋水仙碱是细胞有丝分裂的抑制剂，它的主要作用是抑制纺锤丝微管的形成，因而抑制了染色体移向两极的运动，使细胞停滞在中期状态而不能分裂成二个新的子细胞，而秋水仙碱对染色体结构并无明显的影响，对细胞也不产生严重毒害，细胞解除秋水仙碱环境后仍可正常生长分裂，因而出现细胞含有多个染色体组的情况，亦即构成了多倍体细胞。如果用秋水仙素处理植物的根尖，则在根尖分生区内可检测到大量染色体加倍的细胞（一）实验材料洋葱根尖，大蒜（Aillumsativum）根尖（二）实验器具显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、1.5ml离心管、滴瓶、玻片、大培养皿、吸水纸、铅笔、移液枪。（三）药品试剂卡诺氏固定液（无水乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液、1NHCl、45%醋酸。实验方法（一）材料准备选取大蒜瓣去皮，用透明胶带固定放在盛有清水的培养皿中，使根部与清水接触，在20～25℃光照条件下培养2天左右。待根尖长到0.5～1cm时，将清水换成含0.1%秋水仙素的水溶液中，置阴暗处培养1～2天，至根尖膨大为止。（二）恢复生长24小时左右，诱导后细胞为多倍体细胞。实验方法（三）固定通常采用的是卡诺氏固定液。目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投入固定液中室温处理3～24小时。（四）解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层分解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后的根尖用清水洗几次，吸干水，加入1NHCl溶液，在60℃下水解不超过5min（解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状）。解离后的根尖用水轻洗2～3次，以利于着色。

（五）染色、压片将解离后的根尖用蒸馏水冲洗后，放入45%醋酸中软化5min左右，制片时，取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色15分钟左右。用刀片在材料的上方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再将多余的染料用吸水纸吸走，加盖玻片。用铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。细胞学观察

用根尖压片法制成染色体玻片标本，在显微镜下认真观察和染色体计数，与对照进行对比。二倍体和四倍体作业及思考题1.与对照植物相比，处理后的多倍体植物有哪些不同特征？2.你观察到的被鉴定物种的染色体数目是多少？处理后得到了哪些染色体数目变异类型的细胞？*实验材料、器具与试剂实验方法。注意事项

秋水仙素为剧毒药品，实验中应注意不要将药品沾到皮肤上，眼睛中。如果沾到皮肤上，应用大量自来水冲洗。*