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核酸分子杂交分子杂交技术就是利用了核酸分子的变性与复性原理，使变性的核酸分子与检测核酸分子在碱基互补的条件下形成杂交双螺旋的过程。核酸分子杂交技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，也是临床分子检验的重要技术。第一节杂交的双方:1.待测核酸序列：可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。2.核酸探针：是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。第二节1.固相分子杂交（solid-phasehybridization）：是将待测的靶核苷酸链预先固定在固体支持物（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，然后放入含有标记探针的杂交液中，进行杂交反应后，使杂交分子留在支持物上，故也称为膜上印迹杂交。固体杂交的优点：未杂交的游离探针通过漂洗可容易除去，膜上的杂交分子容易检测，还能防止靶DNA的自我复性，所以被广泛应用。二、分子杂交技术一般过程☆探针制备及标记（同位素或非同位素）☆待测核酸样品制备（分离，纯化）☆杂交（液相，固相，原位杂交）☆杂交后处理（去掉非特异杂交分子）☆显示结果（显色，发光，放射自显影）☆结果分析（一）SouthernBlotting毛细转移真空转移电转移预杂交prehybridization概念：为了减少探针与广泛存在的非互补核酸的非特异性结合，在杂交前用封闭物将这些非特异性位点封闭。这一杂交前的处理过程称为预杂交。（二）NorthernBlot三、斑点及狭缝杂交四、原位杂交

（insituhybridization）第三节生物芯片第四节一、合成寡核苷酸探针注意原则(1)长度（10-50bp);(2)G:C对含量40%-60%；(3)探针内避免互补；(4)避免同一碱基连续出现；(5)与非靶序列有70%以上同源性或连续8个以上碱基序列相同，最好不用。(1)标记前后探针基本结构、化学性质相同;(2)特异性强、本底低、重复性好；(3)操作简单、节时；(4)安全、无环境污染。2、标记物的种类32P、35S、3H、125I等第五节影响杂交的因素杂交类型检测目的及范围Southern印迹杂交检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的DNA分子Northern印迹杂交检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的RNA分子Westernblot检测经凝胶电泳分离固定在膜上的蛋白质分子原位杂交检测细胞或组织中的DNA或RNA分子生物芯片批量检测细胞或组织样品中的蛋白质生物芯片技术生物芯片（biochip）是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，主要是指通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、DNA及其他生物组分的准确、快速与大信息量的检测。DNA芯片

蛋白质芯片

其它芯片生物芯片包括：按用途分：-样品制备芯片

-生化反应芯片-检测芯片是指将许多特定的DNA片段有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一位点的荧光信号做出检测、比较和分析，从而迅速得出定性和定量的结果。该技术亦被称作DNA微阵列(DNAmicroarray)。一、基因芯片基因芯片(genechip)基因芯片(genechip)Cy3Cy5许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针Cy3Cy5是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。二、蛋白质芯片蛋白质分子间的亲和反应蛋白质芯片(proteinchip)蛋白质芯片作用原理蛋白质芯片(proteinchip)抗原芯片原理图探针的制备与标记核酸探针（probe）：探针是指带有检测标记的，能与被检测核苷酸片段互补的一段已知核苷酸片段。cDNA探针基因组DNA探针寡核苷酸探针RNA探针探针的种类：二、标记物1、一个理想的标记物应满足：半抗原：生物素（biotin）、地高辛（Dig）荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）、罗丹明等酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等化学发光探针非核素标记物核素标记物细胞组织化学试剂裂解细胞匀浆器研磨破碎组织中的细胞蛋白