3.2.1 目的基因的筛选与获取-高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptx

从社会中来;;基因工程的基本操作程序;第一步：目的基因的筛选与获取;;;3.原核细胞与真核细胞的基因结构比较;（二）获取方法：;1.从基因文库中获取目的基因;①基因组文库的构建模式图;②部分基因文库构建模式图;⑶基因组文库和部分基因文库的比较;目的基因的mRNA;⑶人工合成法;是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。;⑶条件;;平面结构;解旋

形成子链

螺旋化;;引物;复性;⑹PCR反应过程：;;;;;;思考：在利用PCR获取和扩增目的基因时，至少几轮循环才能从DNA分子中获得只含目的基因的片段？;第n次循环，消耗个引物;比较PCR扩增技术和体内DNA复制的异同;②设计引物的依据是：;设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。;设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。;设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。;设计引物;一、实验原理

1.利用PCR在体外进行DNA片段扩增的原理

①PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。

②PCR扩增DNA片段利用了DNA半保留复制的原理；

③一次PCR一般要经历30次循环。;2.DNA片段电泳鉴定的原理

①电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。

②PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。

③在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。

④凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯

下被检测出来。

;二、材料用具

1.试剂①无菌水、琼脂糖

②电泳缓冲液（TAE或TBE）

③凝胶载样缓冲液（内含指示剂——溴酚蓝）

④核酸染料（常用核酸染料为EB即溴化乙锭）

⑤PCR反应体系的配方;2.用具

①PCR仪（自动控温，实现DNA的扩增）

②微量离心管（实际上是进行PCR反应的场所）

③微量移液器（用于向微量离心管转移PCR配方中的液体）

④一次性吸液枪头（微量移液器吸取一种试剂更换一次枪头）

⑤电泳装置（包括电泳仪、电泳槽等）;三、方法步骤

1.DNA片段的扩增;2.DNA片段的电泳鉴定;若电泳缓冲液使DNA带负电荷，加样孔侧应连电极的哪一极？;四、注意

1.为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。

2.该实验所需材料可以直接从公司购买，缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。

3.在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。

4.在进行操作时，一定要戴好一次性手套。

5.PCR扩增不能随意加大试剂用量。;五、结果分析与评价

1.成功扩增出DNA片段的判断依据是什么？

2.进行电泳鉴定的结果应该是几条条带？

3.如图所示，该片段大小约为____bp;4.如果未出现条带，可能原因是什么？