1.2.1基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

普通棉花转基因抗虫棉将苏云金芽孢杆菌中的Bt抗虫蛋白基因转入普通棉花我国是棉花的生产和消费大国。棉花在种植过程中，常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最为常见。如何能培育出自身就能抵抗虫害的棉花新品种呢？问题探讨

苏云金芽孢杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子培育转基因抗虫棉的简要过程问题探讨

第二节基因工程的基本操作程序专题一基因工程

阅读课本8-15页，基因工程的基本操作程序思考并完成导学提纲

基因工程的基本操作程序（4个步骤）1234目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定

转录DNARNA翻译蛋白质逆转录复制复制中心法则——克里克基因的表达：指的是转录和翻译的过程。

基因是有遗传效应的DNA片段DNA片段基因1基因2基因3放大非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游编码区：能转录相应的mRNA，进一步编码（翻译）出蛋白质的DNA区段。非编码区：不能转录为相应的mRNA，不能编码蛋白质的区段。

基因是有遗传效应的DNA片段——原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子连续的RNA聚合酶识别并结合的位点，驱动基因转录出mRNA启动子本质：位置：作用：是一段有特殊序列结构的DNA片段位于基因上游

非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子连续的终止子本质：位置：作用：也是一段有特殊序列结构的DNA片段位于基因下游终止转录基因是有遗传效应的DNA片段——原核细胞的基因结构

非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子间隔的、不连续的内含子外显子外显子：内含子：能转录相应的mRNA，进一步能编码蛋白质的DNA序列。能转录相应的mRNA，但却不能编码蛋白质的DNA序列。基因是有遗传效应的DNA片段——真核细胞的基因结构

启动子终止子内含子外显子转录hnRNA(mRNA的前体）成熟mRNA加工基因是有遗传效应的DNA片段——真核细胞的基因结构思考：真核细胞基因编码区中的内含子不编码蛋白质，但表达时是否转录？蛋白质翻译

项目原核细胞真核细胞不同点编码区是的编码区是间隔的、的相同点都有能够编码蛋白质的和具有调控作用的区组成的连续不连续编码区非编码非编码序列=非编码区原核基因：非编码序列真核基因：=非编码区+内含子基因是有遗传效应的DNA片段

第一步目的基因的获取一.目的基因（1）概念：与生物抗逆性、优良品质、生物药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。（Bt抗虫蛋白基因：转基因抗虫棉）。主要指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子（2）实例：

第一步目的基因的获取二.目的基因的获取方法基因组文库（包含一种生物的所有基因）部分基因文库（包含一种生物的一部分基因）

（如cDNA文库）基因文库类型:方法一：从基因文库中获取目的基因方法二：人工合成方法三：利用PCR技术扩增目的基因

第一步目的基因的获取（1）构建基因组文库提取某生物全部DNA用适当限制酶切割许多DNA片段该生物基因组文库每个受体菌含有一段不同的DNA片段与载体连接导入受体菌群方法一：从基因文库中获取目的基因二.目的基因的获取方法

第一步目的基因的获取（2）构建cDNA文库——mRNA逆转录形成mRNA杂交双链单链DNA双链cDNA(cDNA)该生物cDNA文库基因组文库中的基因含有启动子、终止子、内含子，cDNA文库中的基因不含以上结构。与载体连接导入受体菌群逆转录酶核酸酶DNA聚合酶方法一：从基因文库中获取目的基因

提取某种生物的全部DNA多个一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接，导入受体菌中储存用适当的限制酶切割基因组文库构建基因组文库的构建

某种生物的单链mRNA单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDNA文库逆转录酶DNA聚合酶构建cDNA文库构建

第一步目的基因的获取二.目的基因的获取方法方法三：利用PCR技术扩增目的基因PCR是多聚酶链式反应的缩写，根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。概念原理：DNA双链复制

第一步目的基因的获取体内DNA复制要点回顾（1）条件原料：游离的脱氧核苷酸（A、T、G、C）模板：DNA的两条链酶：解旋酶、DNA聚合酶等能量：ATP（2）复制原则：碱基互补配对原则（保证复制的准确进行）

热稳定DNA聚合酶（Taq酶）4种脱氧核苷酸引物（2种）模板DNA5’5’变性(90~95℃）复性(55~60℃）延伸(70~75℃）温度上升到90℃以上