紫外分光光度计.docx

紫外分光光度计：

工作原理：

物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。

利用物质的分子或离子对某一波长范围光的吸收作用，对物质进行定性、定量分析以及结构分析。

紫外分光光度法

首先确定实验条件，并在此条件下测得标准物质的吸收峰以及其对应波长值（同时可获得该物质的最大吸收波长）；再在选定的波长范围内（或最大波长值处），分别以（不同浓度）标准溶液的吸光度和溶液浓度为横、纵坐标绘出化合物溶液的标准曲线得到其所对应的数学方程；接着在相同实验条件下配制待测溶液，测得待测溶液的吸光度，最后用已获得的标准曲线方程求出待测溶液中所需测定的化合物的含量。

使用范围：

凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。分光光度法只适用于微量组分的定量分析(稀溶液，浓度在线性范围内，（c＜0.01mol/L)，浓溶液中光吸收定律将发生偏离，最适宜的吸光度测量范围为0.2-0.8之间（此时误差小）。

波长范围：

可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。

光源：在仪器的波长范围内提供足够的、稳定的连续的光。

汞灯：标准光源、最为精确，常用于校准作用。

氘灯、钨灯、氙灯

样品池：在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池也可用石英池。当溶液中含有染料（如考马斯亮兰）时，必须采用一次性的塑料杯，因为染料能让石英和玻璃着色，而且不易清洗干净。

应用：

1检定物质——根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。2与标准物及标准图谱对照——将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。3比较最大吸收波长吸收系数的一致性4纯度检验5推测化合物的分子结构6氢键强度的测定——实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。7络合物组成及稳定常数的测定8反应动力学研究9在有机分析中的应用

单点标定法：测量一个标准样品的吸光度与坐标零点建立工作曲线，测定未知样品浓度

多点标定法：测量已知浓度的一系列标准样品吸光度，建立工作曲线来测定未知浓度

直接紫外特征吸收法原理：利用物质本身或者经过生物化学处理过后，（如水解处理产物）所表

现出来的特征性的紫外吸收光谱进行定性鉴别；

双波长吸收度比法原理：测定两个特定的不同波长处的吸光度，两者比值作为一个可鉴别的

特征量，

三点校正法原理：本法是在三个波长处测得吸光度，根据校正公式计算吸光度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。基于以下两点，

（1）杂质的无关吸收在310nm～340nm的波长范围内几乎是一条直线，且随波长的增大吸光度下降。

（2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸光度是维生素A与杂质吸光度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。

荧光分光光度计：

能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫