免疫学检验技术 课件 06 免疫原和抗体的制备.pptx

免疫原和抗体的制备免疫学检验技术职业教育医学检验技术专业教学资源库

—*—第一节免疫原的制备免疫原的制备一、颗粒性免疫原的制备（绵羊红细胞/细菌）二、可溶性免疫原的制备（蛋白质）三、人工抗原的制备四、免疫佐剂

绵羊红细胞抗原的制备采集健康绵羊的颈静脉血后，立即注入无菌干燥有玻璃珠的三角烧瓶内，充分摇动15～20min，去除纤维蛋白，再以无菌生理盐水洗涤3次，然后取压积红细胞，配成1×106/ml或2%～5%的细胞悬液，置4°C保存可使用3周左右。一、颗粒性免疫原的制备

细菌抗原的制备细菌抗原有鞭毛抗原和菌体抗原等，选取鉴定合格的标准菌株，接种于固体或液体培养基，经集菌后处理。鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要在100℃加温2～2.5小时后应用。（伤寒杆菌菌体抗原→“O”抗原；伤寒杆菌鞭毛抗原→“H”抗原。）一、颗粒性免疫原的制备

可溶性抗原包括蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、细菌毒素、酶类和核酸等，这些抗原大多来源于人和动物的组织或细胞，其成分复杂，通常需要先将组织或细胞破碎，再经一定的方法提取和纯化后才能获得。下面以蛋白质类抗原的制备为例，介绍可溶性免疫原的制备流程。二、可溶性免疫原的制备

（1）组织匀浆的制备方法：①高速捣碎法：在组织中加入适量生理盐水，装入捣碎机筒内，间断粉碎。此法主要适用于内脏组织。②研磨法：用玻璃匀浆器或乳钵研磨，经过旋转、挤压将组织粉碎，此法主要适用于较软嫩的组织（如脑、胰等）。二、可溶性免疫原的制备

（2）细胞的破碎方法：反复冻融法超声破碎法酶处理法自溶法表面活性剂处理法二、可溶性免疫原的制备

（3）可溶性抗原的提取与纯化方法1：超速离心法方法2：选择性沉淀法方法3：凝胶过滤法方法4：离子交换层析法方法5：亲和层析法二、可溶性抗原的制备

可溶性抗原的提取与纯化超速离心法是利用抗原的比重不同而进行分离的方法，可分为差速离心法和梯度离心法。差速离心法是指低速与高速离心交替进行，用于分离比重大小差异较大的抗原。梯度离心法是利用样品中各颗粒在一定密度梯度介质中沉降速度或漂浮速度不同，使具有不同沉浮速度的物质位于不同密度的梯度层内从而进行分离。

可溶性抗原的提取与纯化选择性沉淀法根据不同蛋白质理化特性上的差异，采用各种沉淀剂或改变某些条件促使某一抗原成分沉淀，从而达到纯化的目的。常用的方法有：盐析沉淀法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法、核酸去除法等。动画：盐析沉淀法粗提IgG类抗体

可溶性抗原的提取与纯化凝胶过滤法是利用凝胶的分子筛作用，从而使分子量不同的蛋白质进行分离。通过凝胶的分子筛作用，使蛋白质分子由大到小依次分离，从而达到纯化目的。动画：凝胶过滤纯化抗原

可溶性抗原的提取与纯化离子交换层析法利用一些带离子基团的纤维素或凝胶作离子交换剂，吸附交换带有相反电荷的蛋白质抗原，将蛋白质抗原按所带电荷不同或量的差异分成不同的组分。动画：离子交换层析纯化抗原

可溶性抗原的提取与纯化亲和层析法根据生物大分子之间具有的专一性亲和力而设计的层析技术，在一定的条件下，二者能紧密地结合成复合物。如果将复合物中的已知一方固定于固相载体上，则可从溶液中特异地分离和提纯另一方。动画：亲和层析纯化抗原

（4）纯化抗原的鉴定鉴定内容主要包括分子量、含量、纯度和免疫学活性等。（5）纯化抗原的保存液态或干燥状态低温保存。二、可溶性抗原的制备

人工结合抗原人工合成抗原基因工程抗原三、人工抗原的制备

1．载体的选择蛋白质类、多肽聚合物、大分子聚合物等2．半抗原与载体的连接方法物理方法和化学方法3．人工结合免疫原的鉴定一般认为至少要有20个以上的半抗原连接在一个载体分子上，才能有效地刺激免疫动物产生抗体。三、人工抗原的制备人工结合抗原的制备

用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽，即人工合成抗原。由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽，由两种或两种以上氨基酸形成的聚合物称为共聚多肽。三、人工抗原的制备人工合成抗原的制备

利用分子生物学技术可将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆并与适当载体DNA分子相结合，然后转入受体细胞中使之表达，可获得具有免疫原性的重组蛋白，经纯化后可作为抗原，即基因工程抗原。三、人工抗原的制备基因工程抗原的制备

概念免疫佐剂简称佐剂，是先于抗原或与抗原一起注入机体，可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型的物质。可视为一类非特异性的免疫增强剂。四、免疫佐剂

佐剂的种类无机佐剂有机佐剂合成佐剂油剂（弗氏佐剂）四、免疫佐剂

弗氏佐剂弗氏佐剂（弗氏完全佐剂=弗氏不完全佐剂+卡介苗）四、免疫佐剂

弗氏佐剂使用弗氏佐剂免疫动物前，