食品免疫学免疫检测技术-1.ppt

二、凝胶内沉淀试验原理：可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。原理原理：抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。技术要点：将抗体混入0.9%琼脂糖内（50℃），未凝固前倾注成平板，凝固后打孔（直径3～5mm），孔中加入抗原溶液和不同浓度的标准品，置湿盒内37℃,24～48h观察孔周围是否出现沉淀环。定量试验（一）单向扩散试验（平板法）倾注平板打孔加样放置37℃24～48h观察沉淀环原理：将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。技术要点：平板玻璃上倾注一层均匀的琼脂糖薄层，凝固后打孔，孔径为3mm，孔间距在3～5mm之间，在相对的孔中加入抗原或抗体，放置湿盒37℃18～24h后，观察孔周围是否出现沉淀环。鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一二、双向扩散试验（平板法）（二）双向扩散试验（平板法）主要应用?1.抗原或抗体的存在,及相对含量的估计?2.抗原或抗体相对分子量的估计?3.抗原性质的分析?4.抗原或抗体纯度的鉴定?5.抗体效价的滴定免疫检测技术（1）非标记免疫检测技术第1节凝集反应凝集反应定义细菌、螺旋体、红细胞或其他颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。反应阶段：抗原抗体的特异性结合阶段出现肉眼可见凝集阶段反应特点：IgM的作用比IgG大数百倍,易出现可见凝集IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体。凝集反应的阶段和特点一、直接凝集反应直接凝集反应(directagglutination)：颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。Q（一）玻片凝集-检测血型AB无反应凝集反应体系（载玻片）红细胞（抗凝血）抗血清（血型抗体）（二）试管凝集-肥达反应反应体系（试管）菌液血清方法评价：半定量试验简便、快速敏感度低可有假阳性临床应用：WidalreactionWeil-felixreactionWrighttest:布鲁菌病交叉配血试验（三）间接凝集反应间接凝集反应(indirectagglutination):将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象正向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验协同凝集试验按原理，间接凝集反应可分为如下4种类型：用抗原致敏载体--检测抗体?正向间接凝集试反应?反向间接凝集反应用抗体致敏载体----检测抗原?间接凝集抑制试验用抗原致敏载体—竞争法检测抗原?协同凝集反应SPA能与IgG的Fc片段非特异性结合,同时不影响Fab片段的活性,所以当带有SPA的金黄色葡萄球菌与抗体混合,再加入适量的相应抗原,产生凝集现象。实际应用的凝集反应1.血凝试验(直接凝集）?可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64，同时设不含标本的稀释液对照孔。2.胶乳凝集试验（间接凝集）抗球蛋白试验又称Coombs试验三、抗球蛋白试验（检测抗体的凝集反应）（一）直接Coombs试验不完全抗体检测红细胞上抗体（二）间接Coombs试验检测血清中的抗红细胞抗体Coomb实验在临床的应用在输血上的应用--血型抗原抗体的检查对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对溶血性贫血的研究细菌或立克次体的不完全抗体检查第2节沉淀反应沉淀反应（precipitation）是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现的沉淀现象,其特性与经典的抗原抗体反应相同。形成肉眼可见免疫复合物的阶段。沉淀线或沉淀环的观察以及免疫比浊法中的终点法就是测定此阶段形成的复合物第一阶段第二阶段沉淀反应分两个阶段抗原抗体特异性结合阶段。快速但不可见，免疫比浊法中的速率法就是利用此阶段测定免疫复合物形成的速率。一、液体内沉淀试验原理：絮状沉淀试验是将抗原与相应抗