医学课件-基因工程及其医学应用.pptVIP

特点能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗传信息,会赋予宿主细胞一些遗传性状。质粒(plasmid)M13噬菌体DNA改造系统（含lacZ基因）M13mp系列pUC系列λ噬菌体DNA改造系统λgt系列（插入型，适用cDNA克隆）EMBL系列（置换型，适用基因组克隆）噬菌体(phage)粘性质粒(cosmid)酵母人工染色体(yeastartificialchromosome,YAC)细菌人工染色体(bacterialartificialchromosome,BAC)动物病毒DNA改造的载体（如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）其他二、常用技术的原理和用途核酸探针与分子杂交核酸分子杂交(nucleicacidhybridization)在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex)。复性RNADNA探针技术探针(probe)一小段用同位素、生物素或荧光染料标标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。DNA印迹技术(Southernblotting)01RNA印迹技术(Northernblotting)03蛋白质的印迹分析(Westernblotting)05用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。02用于RNA的定性定量分析。04用于蛋白质定性定量及相互作用研究。06其他010102030405斑点印迹(dotblotting)原位杂交(insituhybridization)DNA点阵(DNAarray)DNA芯片技术(DNAchip)02030405三种印迹技术的比较DNA点阵（二）聚合酶链反应5?Primer15?Primer2Cycle2Cycle15?5?5?5?5?5?TemplateDNA5?5?5?5?5?5?5?5?Cycle35?5?5?5?5?5?5?5?5?5?5?5?5?5?5?5?25～30次循环后，模板DNA的含量可以扩大100万倍以上。模板DNA特异性引物耐热DNA聚合酶dNTPsMg2+PCR体系基本组成成分变性95?C延伸72?C退火Tm-5?CPCR的基本反应步骤基因突变分析05DNA序列测定04DNA和RNA的微量分析03基因的体外突变02目的基因的克隆01PCR的主要用途三、重组DNA技术基本原理基本原理目的基因的获取DNA导入受体菌外源基因与载体的连接克隆载体的选择和构建重组体的筛选克隆基因的表达以质粒为载体的DNA克隆过程化学合成法要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列。基因组DNA文库(genomicDNAlibrary)cDNA文库(cDNAlibrary)聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)（见第22章）（一）目的基因的获取由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列化学合成法获取目的基因组织或细胞染色体DNA基因片断克隆载体重组DNA分子含重组分子的转化菌限制性内切酶受体菌基因组DNA文库存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合*从基因组DNA文库获取目的基因（一）DNA克隆克隆来自同一始祖的相同拷贝的集合。分子克隆细胞克隆动物克隆DNA克隆应用酶学方法，在体外将某些遗传物质的DNA与载体DNA结合，形成一种具有自我复制能力的DNA分子，转化至宿主细胞中，进行扩增、提取获得大量同一DNA分子。目的基因DNA克隆载体复制子宿主细胞扩增扩增提取DNA分子生物技术工程:基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等目的分离获得某一感兴趣的基因或DNA获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）基因工程(geneticengineering)——实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组DNA工艺学。（二）基因工程SS基因01.基因载体01.重组体01