DB13T 6010-2024 番茄抗病种质资源一年多代快速培育技术规程.docx

ICS

65.020.20

CCS

B05

13

河 北 省 地 方 标 准

DB13/T6010—2024

番茄抗病种质资源一年多代快速培育技术规程

2024-10-28发布 2024-11-28实施

河北省市场监督管理局 发布

DB13/T6010—2024

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I

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前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由河北省农业农村厅提出。

本文件起草单位：河北省农林科学院经济作物研究所、河北省农业项目规划中心。本文件主要起草人：李亚栋、吴志明、杨靖、田哲娟、康忱、高亢、高慧敏。

DB13/T6010—2024

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PAGE1

7.2.2 KASP检测技术

7.2.2 KASP检测技术

7.2.2.1 反应体系

2

番茄抗病种质资源一年多代快速培育技术规程

范围

本文件规定了番茄抗病种质资源一年多代快速培育的前期准备、幼胚成苗、分子标记辅助选择、种植期温光调控等技术要求。

本文件适用于番茄抗病种质资源一年多代的快速培育。

规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

缩略语

下列缩略语适用于本文件：

KASP：竞争性等位基因特异性PCR（KompetitiveAlleleSpecificPCR）SDS：十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate）

TYLCVD：黄化曲叶病毒病（Tomatoyellowleafcurlvirusdisease）ToMVD：番茄花叶病毒病（Tomatomosaicvirusdisease）TSWVD：番茄斑萎病毒病（Tomatospottedwiltvirusdisease）FCRR：镰刀菌颈腐根腐病（Fusariumcrownandrootrotdisease）RKN：根结线虫（Root-knotnematode）

前期准备

仪器、药品

超净工作台、荧光定量PCR仪、荧光定量PCR试剂盒等，其他常用实验仪器、药品见附录Ａ。

番茄种植所需设施、生产资料

主要设施

光照培养室、人工气候室或日光温室。

生产资料

育苗基质、穴盘、穴盘托等，有机肥、复合肥、磷酸二氢钾等常用肥料，百菌清、吡虫啉、菊酯类等常用抑菌防虫药物。

幼胚成苗

果实采集

从番茄植株上采集授粉后25d的果实备用。

幼胚采集

果实表面消毒

在超净工作台内，将采集的果实浸泡在75%的酒精中10min进行表面消毒。

取幼胚

用消毒后的手术刀切开果皮，从果肉中将未成熟种子自胎座上剥离。

清洗

用灭菌的蒸馏水洗去未成熟种子表面的果肉残渣。

幼胚培养

将清洗过的未成熟种子平铺在1/2MS培养基上，放置于温度28℃、光照/黑暗=16h/8h的条件下培养约5d。

移栽炼苗

将发芽种子移栽到穴盘内，加透明罩子保湿。7d后打开罩子炼苗，幼苗生长至三叶一心期，备

用。

分子标记辅助选择

DNA提取

采集番茄幼苗叶片，采用常规的SDS方法或商业试剂盒提取DNA。

分子标记检测

主要抗病基因的分子标记引物

针对番茄TYLCVD、ToMVD、TSWVD、FCRR和RKN等病害，应用表1给出的KASP引物，对番茄种质资源的抗病基因进行分子标记检测。

表1 KASP引物及基因分型判断标准

抗病基因

引物名称

引物序列（5′–3′）

等位基因

抗病类型

Ty-1

Ty-1-Allele-F1

GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAATATGGTAAAGGTGCATCCAGA

A:A

抗病

Ty-1-Allele-F2

GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGAATATGGTAAAGGTGCATCCAGT

T:T

感病

Ty-1-R

CCGTTGATTGAAGAAATTGATG

Mi-1

Mi-1-Allele-R1

GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGATGTTTACAAGTATTTGTGGCG

G:G

抗病

Mi-1-Allele-R2

GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGATGTTTACAAGTATTTGTGGCA

A:A

感病

Mi-1-F

TTCAGACGAAGTTAGACATAAAGGA

Tm-22

Tm-2-Allele-F1

GAAGGTCGGAGTCAACGG