核酸、核苷酸及蛋白质质量与摩尔数的转换.pptx

核酸、核苷酸及蛋白质质量与摩尔数的转换

1.核苷酸分子量

1个脱氧核糖核酸碱基的平均分子量为333Daltons

1个核糖核酸碱基的平均分子量为340Daltons

2.DNA碱基对分子量

一个DNA碱基对(钠盐)的平均分子量=650道尔顿双链DNA分子的分子量(道尔顿)=碱基对数目×650

3.光吸收值与浓度

1OD260dsDNA=50μg/ml=0.15mmol/L

1OD260ssDNA=33μg/ml=0.10mmol/L

1OD260ssRNA=40μg/ml=0.12mmol/L

4.浓度与光吸收值

1mmol/LdsDNA=6.7OD260

1mmol/LssDNA=10.0OD260

1mmol/LssRNA=8.3OD260

5.质量与摩尔数

a对于dsDNA分子

每对碱基的平均分子量(MW)是660pg/pmol

1μgFX174DNA(5,386bp)=0.28pmol

1μgM13mp18/19DNA(7.250bp)=0.21pmol1μglphageDNA(48,502bp)=0.03pmol

b对于ssDNA分子

每个碱基的平均分子量(MW)是330pg/pmolμg×(106pg/1μg)×(pmol/330pg)×(1/N)=pmol

6.摩尔数与质量

a对于dsDNA分子

每对碱基的平均分子量(MW)是660pg/pmolpmol×N×(660pg/pmol)×(1μg/106pg)=μg

1pmol1,000bpDNA=0.66μg

1pmolpUC18/19DNA(2,688bp)=1.77μg

1pmolpBR322DNA(4,361bp)=2.88μg

1pmolSV40DNA(5,243bp)=3.46μg

1pmolFX174DNA(5,386bp)=3.54μg

1pmolM13mp18/19DNA(7.250bp)=4.78μg

1pmollphageDNA(48,502bp)=32.01μg

μg×(106pg/1μg)×(pmol/660pg)×(1/N)=pmol1μg1,000bpDNA=1.52pmol

1μgpUC18/19DNA(2,688bp)=0.57pmol1μgpBR322DNA(4,361bp)=0.36pmol1μgSV40DNA(5,243bp)=0.29pmol

N是核酸碱基对数

b对于ssDNA分子

每个碱基的平均分子量(MW)是330pg/pmol

pmol×N×(330pg/pmol×(1μg/106pg)=μg

7.浓度

C(mmol/Lorpmol/ml)=OD260/(0.01*N)

C(ng/ml)=OD260*MW/(0.01*N)

MW—molecularweight；

N—numberofbases；

OD260—absorbanceat260nm

8.质量浓度与摩尔浓度

1ng/μlNbpDNA≈nM

(÷103)÷(××N)

103pg660×103Npg

=÷

nmol

=

μl

=

106nmol

=×

=nM

≈nM

9.核酸末端浓度

双链DNA分子的末端摩尔数=2×DNA质量(克)/DNA分子量(道尔顿)

限制性内切酶酶切后的DNA末端摩尔数:

a环状DNA分子：2×DNA摩尔数×位点数

pmolends=pmolDNA*numberofcuts*2

b线性DNA分子：2×DNA摩尔数×位点数+2×DNA摩尔数

pmolends=pmolDNA*(numberofcuts*2+2)

1μg1,000bpDNA=3.04pmolends

1μgpUC1