DB21T 2548-2015 种猪氟烷基因PCR-RFLP检测技术规程.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2548—2015

种猪氟烷基因PCR-RFLP检测技术规程

MethodofPCR-RELPfordetectinghalothanegenotypeinswine

2015—12—15发布2016—02—15实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2548—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009标准给出的规则制定。

附录A、附录B和附录C均为规范性附录。

本标准由辽宁医学院提出。

本标准由锦州市质量技术监督局归口。

本标准起草单位：辽宁医学院。

本标准主要起草人：苏玉虹、田玉民、朱弘焱、李立山、王立辛、王希。

1

DB21/T2548—2015

种猪氟烷基因PCR-RFLP检测技术规程

1范围

本标准规定了种猪氟烷基因的PCR-RFLP（聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性）检测条件、

检测步骤和结果判定的技术要求。

本标准适用于种猪氟烷基因的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.2-2004转基因产品检测实验室技术要求

GB/T27476.1-2014检测实验室安全第1部分：总则

3术语和定义

3.1

氟烷基因halothanegene

即兰尼定受体1(RyanodineReceptor1,RYR1)基因，定位于猪6号染色体6p1.2，在基因序列数据库

（GenBbank）中的登录号为X69465.1，全长29699bp，mRNA为15378bp。该基因编码骨骼肌钙离子

释放通道蛋白，是猪应激综合征（PorcineStressSyndrome,PSS）的主效基因。

4防污染措施

检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T19495.2第七章规定执行。

5安全防护

实验室安全防护按GB/T27476.1第五章规定执行。

2

DB21/T2548—2015

6检测条件

6.1实验室条件

按GB/T19495.2中的规定执行。

6.2扩增种猪氟烷基因片段的PCR引物

——上游引物F：5′TCCAGTTTGCCACAGGTCCTACCA3′

——下游引物R：5′TTCACCGGAGTGGAGTCTCTGAG3′。

6.3主要试剂

水应符合GB/T6682的灭菌双蒸水。

裂解液、10%SDS、饱和酚、TE缓冲液、TBE缓冲液、上样缓冲液、溴化乙锭（EB）溶液、2×Pfu

PCRMasterMix、限制性内切酶HhaI及10×M酶切缓冲液、蛋白酶K、DNA分子质量标准品等。具体配

制方法参见附录A。

6.4主要仪器

微量移液器、高速冷冻离心机、核