肝炎病毒抗原抗体检测的.pptVIP

**肝炎病毒抗原抗体检测的

原理及检测试剂的选择原则

解放军第四七四医院张和平**ELISA原理

HBsAg:双抗体夹心法

HBeAg:双抗体夹心法抗

HBs:双抗原夹心法

抗Hbe:竞争法

抗HBc:竞争法

双抗体夹心法在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成“夹心复合物”。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，如按常法测定，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hookeffect）因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。两对半与美国Abbott试剂的比较

河北医学杂志（新）2005年第10期总第10期(月刊)论著乙型肝炎病毒（HBV）标志物是国内实验室经常检测的项目。两对半试剂生产厂家较多，试剂质量良莠不齐。五家试剂公司分别为英科新创（厦门）科技有限公司、上海荣盛生物技术有限公司、北京万泰生物药业有限公司、珠海丽珠试剂有限公司、深圳月亮湾生物工程有限公司。各厂家质量有较大差异,为了提高乙肝两对半的检验质量，避免误诊、漏诊，以美国Abbott试剂作为参比试剂，对五家公司的两对半试剂的质量进行了对比、评价［4］。两对半与美国Abbott试剂的比较**本次试验AbbottAxsym系统检测标本中HBsAg结果最高至210S/CO，HBsAb结果最高至6000mIU/mL，HBeAg最高至11600PEIU/mL，以Abbott试剂测定标本的S/CO值为横坐标，五家试剂测定相应标本的OD值为纵坐标，分别绘出了HBsAg、HBsAb及HBeAg的浓度关系图，故在实际应用中的许多一步法试剂仍有HOOK效应存在。对于HBsAg,A、C、D三家试剂存在HOOK效应；对于HBsAb,A试剂存在HOOK效应；对于HBeAg，D试剂存在HOOK效应。此结果可供临床检验部门参考。两对半与美国Abbott试剂的比较**01040203五家试剂对于HBsAg,HBsAb,HBeAg项目的可检出检测下线分别为5.0S/CO、17mIU/mL、8.5PEIU/mL,2而Abbott试剂的阳性检测下线分别是1.0S/CO、10mIU/mL、0.28PEIU/Ml,说明五家试剂在灵敏度上均低于Abbott试剂,国外全自动分析仪系统检测灵敏度，速度，准确性均高于国内试剂。各家ELISA试剂的各个检测项目特异性均较好，灵敏度相对较差，尤其是HBeAg，需要提高灵敏度［11］。结果表明除对于HBcAb试剂D的相对灵敏度较差外；其它的各家试剂的各个检测项目的相对灵敏度、相对特异性及总符合率均较好，基本上能满足临床及实验室的要求，此结果可供参考。双抗体夹心法**因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。双抗体夹心法**用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，应分别包被固相和制备酶结合物。例如HBsAg的a决定簇，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，双抗原夹心法测抗体**3241反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。竞争法测抗体**A其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。B标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。C抗HBc.抗Hbe:ELISA一般采用此法。试剂盒选择**卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。1灵敏度：2为试剂检出