DB21T 2468-2015 新城疫免疫抗体监测技术规范　.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2468—2015

新城疫免疫抗体监测技术规范

TechnicalspecificationformonitoringimmuneantibodyofNewcastledisease

2015-04-30发布2015-06-30实施

辽宁省质量技术监督局发布

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DB21/T2468—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本标准主要起草人：王宏燕、赵晓彤、薛树山、闫海滨、马建山、石霖、李清竹、吴运谱、何欣、王志国、赵鹏、李晓楠。

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DB21/T2468—2015

新城疫免疫抗体监测技术规范

1范围

本标准规定了新城疫免疫抗体监测技术中的样品采集和制备、血凝试验、血凝抑制试验的操作规程和综合判定。

本标准适用于新城疫疫苗免疫抗体监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T16550-2008新城疫诊断技术

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

HA：血凝（hemagglutination）

HAU：血凝单位（hemagglutinationunit）

HI：血凝抑制（hemagglutinationinhibition）

4器材与试剂

4.1器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器、滴头、

96孔90度V形血凝反应板。

4.2阿氏液(AlseversSolution)：配制方法参见附录A中A.1。

4.3pH7.20.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）：配制方法参见附录A中A.2。

4.41%鸡红细胞悬液：配制方法参见附录A中A.3。

4.5标准新城疫病毒抗原、阳性对照血清和阴性对照血清。

5抽样样本量大小的确定

5.1无限群抽样样本量n值的计算

按照预期新城疫免疫抗体合格率为70%,可接受的最大绝对误差为5%，置信水平为95%，根据公式n=p(1-p)×z2/e2计算出n值，其中z值为95%置信水平对应的标准正态分布1-α/2百分位点，为1.96，将p=0.7、z=1.96、e=0.05计算出n值为323。

5.2有限群抽样样本量nα值的计算

根据公式nα=n×N/(N+n)，计算出群体实际抽样数量，其中N为群体数量，nα为抽样数量。

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DB21/T2468—2015

6样品采集和制备

6.1血液采集

将鸡侧卧保定后，用酒精棉球消毒翅静脉窝区，在距离翅静脉窝约0.3cm处，使针管与近心端保持45度进针，稍稍将针头轻插进血管，轻拉活塞，当有血液开始被吸出后，保持注射器位置不动，让血液缓缓吸入注射器针管内，达到所需的采血量后，用棉球压迫血管上的伤口约30s。

6.2血清分离

采集到血液后，立即将针头拔掉，把注射器内的血液沿着试管壁徐徐注入，不能有气泡，也不能振荡。逐一编号，仔细核对，倾斜放置。血液样品夏天在常温下、冬天在25℃~37℃温箱中放置1h左右，析出血清。

6.3血清运输

运输时将血清与采样记录一同装入隔热坚固、内装适当冷冻剂和防震材料的专用运输容器中。外包装上要加贴生物安全警示标志。

6.4血清保存

血清保存在-20℃~-70℃低温冰箱中，避免反复冻融。

7HA试验方法

7.1取新城疫病毒抗原1瓶，加入2mLPBS，充分溶解，制成新城疫病毒抗原悬液。

7.2取孔面规整、内壁光滑的96孔90度V型血凝反应板，在A1～C12孔中加入0.025mLPBS。

7.3吸取0.025mL新城疫病毒抗原悬液，加入A1～C1孔，吹打3～5次充分混匀。

7.4从A1～C1孔吸取0.025mL加入第A2～C2孔，混匀后吸取0.025mL加入A3～C3孔，依次进行倍比稀释至A11～C11孔，最后从A11～C11孔吸取0.025mL弃去。

7.5A1～C12孔补加0.025mLPBS。

7.6A1～C12孔加入1%鸡红细胞悬液，A12～C12孔为红细胞对照。