微生物菌株保藏操作规程.docx

微生物菌株保藏是指对微生物（如细菌、真菌、病毒等）进行长期保存和管理，以确保其生物学特性和遗传特性得到有效保存，便于科研、临床或工业应用。正确的菌株保藏方法能避免菌株变异、丧失活性或污染。以下是微生物菌株保藏的操作规程：

菌株选定与标注

?一、菌株选定

确定实验目标：

根据实验目的选择合适的菌株，如用于研究微生物的生理特性、药物敏感性、基因组特性等。

选择具有代表性的标准菌株或从自然环境中分离的菌株。

选择标准菌株或分离菌株：

标准菌株：常用的已知表型和基因型的菌株，便于与其他研究者结果比较。

分离菌株：根据实验需要从环境中分离的菌株。分离后需要进行鉴定，确认其种类及特征。

菌株的鉴定：

通过形态学特征、培养特性、生理生化测试、分子生物学方法等鉴定菌株的种类和特性。

可进行基因组序列分析确认菌种的准确性。

菌株的健康状况：

在选定菌株时，确认其为活性良好的菌株，避免使用已经死亡或退化的菌株。

二菌株标注操作规程

标注要求：

每个菌株在实验室内必须有唯一的标识编号，避免混淆。

标注应准确并具备必要的背景信息，包括：

菌株编号（唯一）

菌种名称

来源（如分离地点、环境、宿主等）

初始培养基

初步鉴定信息

保存日期和方式

负责人

菌株标识方法：

编号系统：采用标准的编号系统，以便管理。编号可以是字母数字组合，便于记录和查询。

标签信息：使用标签纸或者永久性标记工具，确保标识在冷冻、干燥或其他存储条件下不易脱落或损坏。

数据库管理：将菌株的基本信息输入菌株管理数据库，便于快速查找和追踪。

标注记录：

每次操作时（如传代、培养、鉴定、保存等）都应更新菌株的记录，确保实验的可追溯性。

记录内容应包括操作人员、操作时间、实验过程和结果等详细信息。

二、培养设备的准备

设备清洁与消毒：

所有使用的培养设备（如培养皿、试管、瓶、培养箱等）应在使用前进行彻底清洁，消毒。培养箱、无菌工作台、气体消毒柜等需进行适当消毒。

使用70%酒精、紫外线等手段对工作台面进行消毒，避免交叉污染。

恒温箱的预热：

根据菌株的生长需求，设置恒温箱的温度并进行预热，确保设备达到所需的恒定温度，避免因温度波动对菌株生长的影响。

常见的温度设置为25°C、30°C、37°C等，具体温度视菌株特性而定。

无菌工作台的准备：

在使用前，应先开机并预热10-15分钟，确保无菌工作台内的气流达到最佳状态。

在无菌工作台内，操作时避免接触台面，避免任何污染源进入工作台环境。

其他设备的检查：

需要的其他设备，如显微镜、分液器、离心机等，应事先检查并确保其正常运行。

确保试剂瓶、培养瓶、移液管、培养皿等一次性用品准备齐全，并已经灭菌处理。

3.菌株培养

接种培养：?从原种中取样：

液氮保存菌株：如果菌株存储在液氮中，首先将保存管取出，迅速在无菌环境下解冻。常见的解冻方法是将冻存管浸入37°C温水中几秒钟，避免长时间解冻。

传代菌株：如果菌株为传代菌株，则可以直接从保存的培养基或固体培养基上取样。取样时应使用无菌接种环或移液管，以防污染。

在操作过程中，避免菌株暴露在空气中过长时间，尽量减少污染的风险。

?接种到合适的培养基：

根据菌株的特性（如营养需求、形态特征、增殖速度等），选择合适的固体或液体培养基进行接种。

固体培养基：通常用于分离单菌落、菌株鉴定或进行形态观察。

液体培养基：用于菌株的增殖、产物分析等，通常在无菌条件下分装到适当的瓶或试管中。

接种方法：

接种环法：用无菌接种环从原种中取少量菌液，轻轻划线接种到固体培养基的表面，确保接种均匀，避免过度接种。

点接法：用于液体培养基接种，轻轻将菌种滴入培养基中，并保证接种量适宜。

涂布法：对于大规模的菌株培养或计数时，可以使用涂布法在固体培养基表面均匀分布菌株。

培养条件：?温度控制：

菌株的生长温度通常取决于其种类。常见的温度设置有：

常温（20-25°C）：适用于某些嗜冷菌或土壤中常见菌种。

中温（30-37°C）：适合多数细菌和真菌，特别是病原菌或常规实验室培养菌株。

高温（45-55°C）：适用于嗜热菌，如热泉中分离的细菌。

避免温度波动：保持恒定的温度对于细菌的稳定生长非常重要。温度波动可能导致菌株生长不均匀或造成其他不可预测的影响。

?湿度控制：

对于固体培养基上的菌株，湿度也起着重要作用，尤其是在温暖和潮湿的环境中，湿度过高可能导致培养皿中水分积聚，形成不必要的液滴，影响菌株的生长。

湿度调节：通过调节培养箱中的湿度控制装置或放置适量的水源来维持湿度，通常保持在50%-70%的相对湿度为宜。

?氧气条件：

根据菌株的需氧性，调整培养环境的氧气浓度：

需氧菌：需要氧气进行生长，如大多数细菌。应确保培养箱有良好的空气流通或加装通风系统。

厌氧菌：不需要氧气，甚至可能对氧气敏感。需要将培养瓶放入