高效液相色谱课件.ppt

172高效液相色谱§2高效液相色谱仪§2172高效液相色谱§2高效液相色谱仪3）荧光检测器灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。§2172高效液相色谱§2高效液相色谱仪4）电化学检测器电导检测器安培检测器§2172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相二、液固吸附色谱法三、液液分配色谱四、化学键合相色谱法五、离子交换色谱六、凝胶色谱法172高效液相色谱§3§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相1.固定相高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为：刚性固体和硬胶固定相按孔隙深度分类可分为：表面多孔型和全多孔型固定相172高效液相色谱§3§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相1.固定相刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0?108～1.0?109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。是目前最广泛使用的一种固定相。172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相1.固定相硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5?108Pa。§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型表面多孔型担体的基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化硅、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等。其多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达到平衡，较适合做常规分析。§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型全多孔型固定相由直径为10μm的硅胶微粒凝聚而成。由于颗粒很细（5～10?m），孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相2.流动相要求是：1）不与固定相发生不可逆化学反应2）对待测样品有足够的溶解度3）与所用检测器匹配4）粘度尽可能的小5）纯度高§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型二、液固吸附色谱法1、原理2、固定相3、流动相§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型二、液固吸附色谱法1、原理溶质分子和流动相分子在具有表面活性的吸附中心上进行竞争，这种作用还存在于不同溶质分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。由于这些竞争作用，形成了不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液固色谱法的选择性吸附分离原理。§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型二、液固吸附色谱法1、原理吸附竞争的过程可表示为：吸附达到平衡时，平衡系数为：§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型二、液固吸附色谱法2、固定相液固色谱固定相可分为极性和非极性两大类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。至于今液固色谱法应用最广泛的是极性固定相硅胶。§3172高效液相色谱§3高效液相色谱法的类型二、液固吸附色谱法3、流动相选择原则是：极性大的试样选极性强的洗脱剂在液固色谱法中，常用水对硅胶固定相进行减活处理，此时流动相中水的饱和度应小于25%，若水含量过高，大量水附着在硅胶上会使液固色谱过程转变成液液色谱过程而影响分离效果。§3提要返回*由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。*在液相色谱中，当样品组成复杂时，有时会出现先出的峰分不开，后面的峰保留值又太大的现象，这时，可以采用梯度洗脱来调整混合溶剂的组成，改变溶剂强度或选择性。*1）不与固定相发生不可逆化学反应2）对待测样品有足够的溶解度，以提高灵敏度3）与所用检测器匹配4）粘度尽可能的小，以获得较高的柱效5）纯度高172高效液相色谱17高效液相色谱172高效液相色谱主要内容§1概述§2高效液相色谱仪§3高效