高效液相色谱PPT演示文稿.pptx

高效液相色谱仪（HPLC）

??/??2016.01正义公正共生开放性思维主人翁精神

2/7HPLC基本概念与特点：概念：高效液相色谱法系采用髙压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。

3/7HPLC高效液相色谱流程流程与原理：注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4/7HPLC内容高压泵进样器色谱柱检测器储液罐废液流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入系统，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于液体溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸得分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

5/7HPLC储液器（流动相）：1.流动相要过滤，一般用0.45的滤膜，防止流动相中的颗粒进入泵内。2.流动相要脱气，一般超声7到10分钟，根据具体情况可延长超声时间。主要是为了防止流动相从高压柱内流出时释放出气泡进入检测器而使噪声剧增，致使不能正常检测。3.反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5%，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。PH为2~8之间。

6/7HPLC高压泵：高压泵主要用于输送流动相，压力一般为几兆帕至数十兆帕，还有以Bar为单位的，改变流速能改变出峰的保留时间，若无特殊要求，流速一般为1ml/min。进样器：用微量注射器将样品注入样品环，使用时要注意注射器是否有气泡，当峰面积不平行时，要考虑注射器的气泡和进样针是否有堵塞等情况。

7/7HPLC色谱柱：1、反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。2、正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。3、离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。4、温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃

8/7HPLC检测器：1、最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。2、蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应。3、不同的检测器，对流动相的要求不同。

9/7HPLC一、柱温箱及进样阀：1、柱温箱不控制温度，只能控制比室温高的温度，无法控制比室温低的温度，只能用空调，介意开柱温箱，避免昼夜因温差大导致出峰时间改变。2、漏液，发现对照品和样品出峰时间都不规律，面积差别大，根本无法对样品进行定量和定性是，检查色谱柱和金属细管的连接处，若漏液则重新固定。用流动相平衡。设备易出现的问题

10/7HPLC二、高压泵容易出现的问题：1、压力上不去，检查是否漏液，如果漏液，拧紧重新平衡。2、压力过高，若流动相比例没有问题，则要检查以下内容，泵管气泡，色谱柱，泵管，三通，或转换阀是否有堵塞。依次排除后重新平衡。出现堵塞要连接两通，用纯热水（不超过80℃）或用10%以下的甲醇-水或乙腈-水（不超过80℃）冲洗系统，必要时拆卸后用超声锅清洗。三、检测器容易出现的问题：1、流通池污染：出峰诡异，噪声波动大，考虑流通池是否污染或因流动相排空使流通池中进入大量气泡。2、检测器无法点灯：看是不是到了寿命，及时更换。

11/7HPLC四、连接不上电脑，工作站：重新开机，开机顺序，仪器-电脑-检测器五、色谱柱容易出现的问题：1、色谱柱堵塞：显示压力过高，或出峰形状诡异。一般形成原因是使用带有缓冲盐的流动相或比较复杂的样品，使用后未及时冲洗。一般用10%的乙腈-水，加热后冲洗，温度不超过45℃（特殊柱子除外）。2、色谱柱污染：出现前沿，拖尾，用10%的乙腈-水或甲醇-水冲洗，冲洗后用纯乙腈或纯甲醇饱和。下次使用时，用乙腈-水或甲醇-水平衡后使用。

12/7HPLC注意事项：·如果