DB43T 1202-2016 饲料中氟苯尼考的测定 高效液相色谱法.docxVIP

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DB43

湖南省地方标准

DB43/T1202—2016

饲料中氟苯尼考的测定高效液相色谱法

DeterminationofFlorfenicolinfeeds

Highperformanceliquidchromatographicmethod

2016-12-13发布2017-02-13实施

湖南省质量技术监督局发布

I

DB43/T1202—2016

目次

前言 Ⅱ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3原理 1

4试剂与材料 1

5仪器与设备 1

6采样与试样的制备 2

7测定步骤 2

8结果计算 2

9灵敏度、准确度和精密度 3

附录A（资料性附录）氟苯尼考高效液相色谱图 4

II

DB43/T1202—2016

前言

本标准按GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本标准某些内容可能涉及专利，本标准发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。

本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所、湖南省冷水江市农业局。

本标准主要起草人：匡光伟、欧阳龙、隆雪明、邓昉、陈爱忠、张俊波、周玉洁、李裕、易建希、江燕、邓均红。

1

DB43/T1202—2016

饲料中氟苯尼考的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了饲料中氟苯尼考（Florfenicol）的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中氟苯尼考的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

采用30%甲醇溶液提取试样中的氟苯尼考，固相萃取柱净化，乙腈溶液洗脱，高效液相色谱-紫外法测定，外标法定量。

4试剂与材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682一级水的规定。

4.1甲醇，色谱纯。

4.2乙腈，色谱纯。

4.330%甲醇溶液：将30mL甲醇与70mL水混合均匀。

4.440%乙腈溶液：将40mL乙腈与60mL水混合均匀。

4.5氟苯尼考标准品，纯度≥99.7%。

4.6标准储备液：称取氟苯尼考标准品25mg（精确到0.01mg）于25mL的容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，即为1.00mg/mL的氟苯尼考标准储备液。-18℃以下避光保存，可保存1年。

4.7标准工作液：移取适量氟苯尼考标准储备液，用40%乙腈溶液稀释成浓度为(1.00~100)μg/mL的氟苯尼考标准工作液，现配现用。

4.8微孔滤膜：0.22μm，有机膜。

4.9OasisHLB固相萃取柱：60mg，3mL，或相当者。

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪：配有紫外或二极管阵列检测器。

5.2分析天平：感量0.00001g和0.001g。

DB43/T1202—2016

2

5.3离心机：转速≥

5.3离心机：转速≥10000r/min

带有50mL离心管

,

。

5.4超声波清洗机。

6采样与试样的制备

6.1采样按GB/T14699.1的规定执行。

6.2试样制备按GB/T20195的规定执行。

7测定步骤

7.1提取

称取试样2g（精确到0.001g），置于50mL离心管中，准确加入20mL30%甲醇溶液，涡旋振摇1min，超声提取5min，涡旋30s后静置分层，于50mL离心管中10000r/min离心5min，取上清液供固相萃取柱净化。

7.2净化

将固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，准确移取6.0mL上清液过柱，用3mL水、3mL30%甲醇溶液淋洗固相萃取柱，真空抽干。3mL40%乙腈溶液洗脱，收集全部洗脱液。涡旋混匀，0.22μm微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱分析。

7.3测定

7.3.1高效液相色谱参数

色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，或相当者。流动相：乙腈+水（V+V=22+78）。

流速：1.0mL/min。进