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土壤中铜、铅、镉的快速测定酶联免疫法

1范围

本文件规定了采用胶体金免疫层析试纸条快速测定土壤中铜、铅、镉含量的方法。本文件适用于土壤中铜、铅、镉的快速测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

HJ/T166土壤环境监测技术规范

HJ605土壤和沉积物挥发性有机物的测定吹扫捕集/气相色谱-质谱法

3术语和定义

HJ605界定的术语和定义适用于本文件。

4试验原理

利用二氧化钛对土壤浸提液中的重金属离子进行吸附、解吸附操作，氨水调节pH值，富集得到的重金属离子可通过免疫学方法进行检测，也即应用胶体金试纸检测二级以下的土壤中的重金属离子。

胶体金免疫层析法试纸条结构见图1。当T线和C线同时出现红色带时，若T线颜色较C线深或者颜色相同，表示样品中待检物质浓度低于检测限，或不含待检物质，检测结果为阴性；若T线颜色较C线浅或T线未显色，则表示样品中待检物质浓度高于检测限，检测结果为阳性；若C线未显色，检测结果无效，可能是因为操作过程不正确或试纸条已失效。

说明：

A——加样孔；

S——检测区

T——检测线

C——质控线

图1胶体金免疫层析法试纸条结构示意图

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5试剂和材料

除非另有说明，分析中仅使用符合GB/T6682规定的—级水。

5.1硝酸（HNO3）：优级纯。

4M的硝酸溶液：用超纯水将26.88mL的浓硝酸稀释到100mL；分别配制0.5M、1M、2M、3M的稀硝酸溶液。

5.2盐酸（HCL）：优级纯。

4M的盐酸溶液：用超纯水将33.12mL的浓盐酸稀释到100mL；分别配制0.5M、1M、2M、3M的稀盐酸。

5.3硫酸：优级纯。

4M的硫酸溶液：用超纯水将18mL的浓硫酸稀释到100mL；分别配制0.5M、1M、2M、3M的稀硫酸溶液。

5.4混合酸溶液。

按需要取各个浓度的稀盐酸、稀硝酸、稀硫酸溶液分别按1：3、1：1、3：1的体积比两两混合。

5.5氯化钠：分析纯。

5.6EDTA·2Na：分析纯。

0.1MEDTA·2Na：先配制0.15MPBST缓冲液，称取氯化钠8.0g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠2.9g、Tween-200.5mL，加蒸馏水至1.0L；用超纯水和氢氧化钠配制1M的EDTA·2Na溶液，然后用PBST缓冲液将其稀释10倍。

5.7镉离子标准溶液：1000μg/mL。

5.8铅离子标准溶液：1000μg/mL。

5.9铜离子标准溶液：1000μg/mL。

5.10标准土壤：GBW07407(GSS-7)。

5.11二氧化钛：锐钛，5nm～10nm，纯度99.8％。

二氧化钛在使用前用5M的硝酸浸泡30min，然后于4000rpm下离心10min，去掉上清，用二次水进行洗涤，直至将上清液洗至中性，对沉淀物进行抽滤，然后于100℃下烘干，研磨过筛后于避光干燥处保存备用。

5.12氨水：分析纯

浓度为22%氨水溶液：用超纯水和氨水配制。

5.13胶体金免疫层析试纸条，不同金属离子试纸条不同。

市售有证胶体金免疫层析试纸条，也可以配制。

6仪器和设备

6.1样品瓶：带聚四氟乙烯-硅胶衬垫螺旋盖的40mL棕色宽口玻璃瓶。6.2采样器：一次性塑料注射器或不锈钢专用采样器。

6.3离心机。

6.4高速离心机。

6.5超滤离心管。

6.6便携式pH计。

6.7混合振荡仪。

6.8便携式pH计。

6.9胶体金读数仪。

6.10微量移液器：10μl～200μl、100μl～1000μl。

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6.11一般实验室常用仪器和设备。

7样品

7.1样品采集

土壤样品的采集参考HJ/T166的规定。采样部位均为0.0cm～20.0cm的表层土壤，利用蛇形采样法进行，将10个取样点的土壤混合为一个土壤样品，除去土样中的石子和动植物残体，利用四分法取1kg左右土壤于聚四氟乙烯密封袋中。将土壤样品于90℃的鼓风干燥箱中烘干，利用四分法取0.25kg左右的土壤，用玛瑙棒碾碎，过2mm尼龙筛，混匀，继续研磨，过0.154mm(100目)检验筛，于阴凉干燥处保存备用。

7.2样品保存

样品采集后应冷藏运输。运回实验室后应尽快分析。实验室内样品存放区域应无有机物干扰，在4℃以下保存时间为10d。

8试验步骤

8.1样品处理

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