流式细胞术原理及应用.ppt

什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠为什么要进行补偿调节？520400500600700575665FITCPEPC5laserD、单标对照SingleStainingControl第32页,共61页，星期六，2024年，5月第33页,共61页，星期六，2024年，5月补偿调节方法：FL-1(FITC)FL-2(PE)FL-1(FITC)FL-2(PE)FL2-%FL1FL-1(FITC)FL-2(-)FL-1(-)FL-2(PE)FL1-%FL2BeforeCompensationAfterCompensationFITC单标PE单标第34页,共61页，星期六，2024年，5月什么样的补偿最合适？单染管的阴性群体和阳性群体在所需调节通道的荧光Median值相等时为最合适的补偿。UncompensatedCompensatedFL1-FITCstainFL2-nostainFL1-FITCstainPE-MediannegPE-MedianposPE-Medianneg=PE-MedianposPE-MediannegPE-MedianposFL1-FITCstainOvercompensated第35页,共61页，星期六，2024年，5月准确补偿的重要性第36页,共61页，星期六，2024年，5月补偿调节要合适未补偿正确补偿FITC-PE补偿太大PE-FITC补偿太大第37页,共61页，星期六，2024年，5月使用单种荧光素标记的单克隆抗体和其余荧光素对应的同型对照抗体分别染色n色分析就要制备n个补偿对照管举例：双染实验第38页,共61页，星期六，2024年，5月设门与数据分析门(Gate，简写G)是流式细胞术中的一个重要术语，FCM数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。第39页,共61页，星期六，2024年，5月流式结果十字门线性门第40页,共61页，星期六，2024年，5月黏附因子表面受体细胞因子分泌到胞外的细胞因子胞内抗原核酸含量核内抗原细胞功能细胞表面、胞浆、核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性细胞受体细胞内钙离子流式细胞仪检测范围第41页,共61页，星期六，2024年，5月HIV免疫分型，CD4绝对计数白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的交叉配型和免疫状态监测干细胞计数残量白血病细胞检查HLA-B27检查血小板功能及相关疾病医学应用第42页,共61页，星期六，2024年，5月科研应用在免疫学研究中的应用:鉴定免疫细胞类型抗原特异性T细胞研究细胞因子分泌细胞研究全血细胞研究凋亡检测细胞增殖检测干细胞向免疫细胞分化的研究转染荧光蛋白细胞系研究稀有细胞检测。。。在神经生物学研究中的应用：神经干细胞和神经祖细胞的特性研究；不同类型的神经细胞的鉴定和功能研究；星形胶质细胞和胶质细胞的鉴定和功能研究；检测细胞活性，细胞凋亡和细胞周期；神经细胞发育过程研究干细胞向神经细胞分化研究。。。第43页,共61页，星期六，2024年，5月在肿瘤研究中的应用：细胞凋亡的检测；细胞周期分析；细胞增殖研究；荧光蛋白分析；肿瘤干细胞的鉴定和功能分析；循环肿瘤细胞的鉴定和功能分析；实体瘤细胞的检测分析（肿瘤组织解离成单细胞后）；肿瘤细胞系表型分析；细胞活性的检测；。。。在细胞生物学和分子生物学研究中的应用：检测细胞转染效率；检测转导效率；分析细胞中荧光蛋白的表达；分析蛋白—蛋白之间的相互作用（FRET）分析细胞活性，细胞凋亡，和细胞周期；研究细胞的分化过程；研究细胞增殖；。。。第44页,共61页，星期六，2024年，5月在高通量检测和新药研发中的应用：细胞功能变化的研究；细胞周期和活性；细胞凋亡；细胞增殖；新药研发；培养基研发；。。。海洋生物学富集和分析细菌，藻类，浮游植物等微生物学细菌和酵母检测；荧光蛋白检测。

生物燃料Bodipy?和/或NileRed中脂类的定量藻类，蓝藻细菌，酵母和细菌等生物的富集第45页,共61页，星期六，2024年，5月4.1细胞周期检测处于不同细胞周期的细胞DNA含量不同，G0/G1期细胞含有二倍体量的DNA，G2/M期细胞含有四倍体量的DNA，而S期细胞DNA含量处于二倍体和四倍体量之间。DNA荧光染料能与DNA结合，DNA含量的多少与荧光染料的结合量成正比，荧光强度反应了DNA吸收荧光分子的多